[发明专利]一种小鼠骨髓间充质干细胞细胞系的构建方法

摘要

本发明涉及小鼠干细胞培养技术，具体说是一种小鼠骨髓间充质干细胞细胞系的构建方法。包括骨髓提取、间充质干细胞原代培养、传代培养、冷冻保存、复苏、细胞表面分子鉴定、向脂肪细胞以及成骨细胞分化鉴定。其中所采用的细胞培养液为低糖DMEM基础细胞培养液中添加胎牛血清。建立的间充质干细胞细胞系形态为成纤维细胞样，本发明方法操作简单，重复性高，所建立的细胞系可以连续传代，能提供大量的间充质干细胞，并且可向脂肪细胞和成骨细胞分化，可直接用于小鼠功能基因的研究。不仅可望成为干细胞功能与调控机制的研究平台，而且可促进基于间充质干细胞组织工程的实际应用。

主权项

1.一种小鼠骨髓间充质干细胞细胞系的构建方法，其特征在于：1)配制细胞培养液：以DMEM培养液为基础再加入占细胞培养液总体积20％胎牛血清，100U/mL青霉素，100μg/mL链霉素和1％谷氨酰胺，于4℃下保存备用；2)原代培养：向小鼠骨髓中加入步骤1)配制细胞培养液得到悬浮细胞液，而后将悬浮细胞液于37℃、含5％的CO₂和5％的O₂的混合气体下培养，培养4天后弃掉培养液，再加入步骤1)配制的细胞培养液继续培养；3)传代培养：待上述原代培养细胞贴壁融合至第10天时，加入含0.25％浓度的胰蛋白酶进行消化细胞，而后利用步骤1)配制的细胞培养液，以1:1对细胞进行首次传代培养，之后每5‑7天以1:2或1:3进行传代，直至第20代；进而小鼠骨髓来源间充质干细胞细胞系建立成功。