[发明专利]热稳定的Cas9核酸酶在审
| 申请号： | 201780086546.5 | 申请日： | 2017-12-14 |
| 公开（公告）号： | CN110431229A | 公开（公告）日： | 2019-11-08 |
| 发明（设计）人： | 约翰·万德奥斯特;理查德·范克拉嫩堡;艾勒克·芬纳·博斯马;扬尼斯·莫加科斯;普拉塔纳·莫汉拉朱 | 申请（专利权）人： | 瓦赫宁根大学;科学技术基金会 |
| 主分类号： | C12N9/22 | 分类号： | C12N9/22;C12N15/113;C12N15/90 |
| 代理公司： | 北京安信方达知识产权代理有限公司 11262 | 代理人： | 李敏春;郑霞 |
| 地址： | 荷兰瓦*** | 国省代码： | 荷兰;NL |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | 编码来自热脱氮地芽孢杆菌(Geobacillus thermodenitrificans)的ThermoCas9蛋白的多核苷酸和组成型启动子被用于工程化真核细胞，例如真菌、酵母或藻类，使得ThermoCas9核酸内切酶被整合并从细胞的基因组表达。然后，使用第二表达质粒转染这些表达ThermoCas9的细胞，第二质粒包含诱导型启动子和编码指导RNA(guide RNA)的多核苷酸。指导RNA与ThermoCas9组合，以提供靶向的核酸内切酶活性，以在期望的基因座或感兴趣的基因处裂解细胞DNA。还向细胞提供了修复寡聚物，由此在DNA裂解后，同源重组发生在具有修复寡聚物的细胞中，使得在感兴趣的基因座或基因中实现核苷酸的缺失或取代。描述了表达载体和使用所述载体以实现ThermoCas9介导的基因编辑的方法，由此使用更高的温度，例如大于30℃。 | ||
| 搜索关键词： | 细胞 多核苷酸 寡聚物 基因座 基因 核酸内切酶活性 诱导型启动子 组成型启动子 地芽孢杆菌 核酸酶编码 核酸内切酶 基因组表达 修复 表达载体 表达质粒 裂解细胞 同源重组 真核细胞 工程化 核苷酸 热稳定 真菌 靶向 介导 裂解 脱氮 整合 质粒 转染 酵母 藻类 蛋白 期望 | ||
【主权项】：
1.一种修饰真核细胞的遗传物质的方法，所述方法包括(i)将在第一启动子的控制下编码ThermoCas9的多核苷酸整合到所述细胞的基因组中，其中所表达的ThermoCas9包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列或与SEQ ID NO:1具有至少77％同一性的序列，或其活性片段；(ii)用表达载体转化所述细胞，所述表达载体包含编码指导RNA并且在第二启动子的控制下的多核苷酸序列，其中所述指导RNA具有识别在所述细胞的基因组中在期望的靶基因座处包含的核酸序列的核酸序列，和(iii)用修复寡核苷酸转化所述细胞。
下载完整专利技术内容需要扣除积分，VIP会员可以免费下载。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于瓦赫宁根大学;科学技术基金会，未经瓦赫宁根大学;科学技术基金会许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/patent/201780086546.5/，转载请声明来源钻瓜专利网。
- 同类专利
- 一种限制性内切酶MnlI及其表达纯化方法-201910804225.5
- 程槐旭;胡梦竹;燕东平;聂尚海 - 莫纳（武汉）生物科技有限公司
- 2019-08-28 - 2019-11-12 - C12N9/22
- 本发明提供了一种限制性内切酶MnlI及其表达纯化方法，所述方法包括以下步骤：构建限制性内切酶MnlI重组表达载体，转化甲基化感受态细胞，得限制性内切酶MnlI重组菌株，诱导培养，裂解菌体，纯化回收产物，即得限制性内切酶MnlI。表达纯化方式操作简单，快速，收率高，纯化出的限制性内切酶MnlI纯度高。
- 热稳定的Cas9核酸酶-201780086546.5
- 约翰·万德奥斯特;理查德·范克拉嫩堡;艾勒克·芬纳·博斯马;扬尼斯·莫加科斯;普拉塔纳·莫汉拉朱 - 瓦赫宁根大学;科学技术基金会
- 2017-12-14 - 2019-11-08 - C12N9/22
- 编码来自热脱氮地芽孢杆菌(Geobacillus thermodenitrificans)的ThermoCas9蛋白的多核苷酸和组成型启动子被用于工程化真核细胞，例如真菌、酵母或藻类，使得ThermoCas9核酸内切酶被整合并从细胞的基因组表达。然后，使用第二表达质粒转染这些表达ThermoCas9的细胞，第二质粒包含诱导型启动子和编码指导RNA(guide RNA)的多核苷酸。指导RNA与ThermoCas9组合，以提供靶向的核酸内切酶活性，以在期望的基因座或感兴趣的基因处裂解细胞DNA。还向细胞提供了修复寡聚物，由此在DNA裂解后，同源重组发生在具有修复寡聚物的细胞中，使得在感兴趣的基因座或基因中实现核苷酸的缺失或取代。描述了表达载体和使用所述载体以实现ThermoCas9介导的基因编辑的方法，由此使用更高的温度，例如大于30℃。
- 慢病毒和非整合型慢病毒作为病毒载体实施CRISPR治疗-201880005925.1
- 托马斯·马尔科姆;K·哈利利 - 切除生物治疗公司
- 2018-01-17 - 2019-11-08 - C12N9/22
- 本发明涉及用于治疗溶原性病毒的组合物，该组合物包括编码分离的核酸的慢病毒载体，该分离的核酸编码两种或更多种基因编辑器，所述基因编辑器选自靶向病毒DNA的基因编辑器、靶向病毒RNA的基因编辑器、及其组合；治疗裂解性病毒的组合物，该组合物包括编码分离的核酸的慢病毒载体，所述分离的核酸编码至少一种靶向病毒DNA的基因编辑器以及靶向病毒RNA的成分；用于治疗溶原性病毒和裂解性病毒的组合物，该组合物包括编码分离的核酸的慢病毒载体，该分离的核酸编码靶向病毒RNA的两种或更多种基因编辑器；用于治疗裂解性病毒的组合物；以及通过向具有病毒的个体施用上述组合物并灭活该病毒来治疗溶原性病毒或裂解性病毒的方法。
- CRISPR/Cpf1系统和方法-201780072070.X
- M·A·贝尔克;M·A·科林伍德;R·图克;C·A·瓦库斯卡斯 - 综合DNA技术公司
- 2017-11-22 - 2019-11-01 - C12N9/22
- 本发明涉及用于CRISPR/Cpf1核酸内切酶系统的重组AsCpf1和LbCpf1核酸和多肽，和编码重组的AsCpf1或LbCpf1多肽的哺乳动物细胞系。本发明包括包含合适的AsCpf1 crRNA的重组的核糖核蛋白复合物和CRSPR/Cpf1核酸内切酶系统，所述合适的AsCpf1 crRNA选自长度截短的AsCpf1 crRNA、化学修饰的AsCpf1 crRNA或包含长度截短和化学修饰两者的AsCpf1 crRNA。还提供使用这些系统和试剂进行基因编辑的方法。
- 一种限制性内切酶SmaI及其表达纯化方法-201910804223.6
- 程槐旭;胡梦竹;燕东平;聂尚海 - 莫纳（武汉）生物科技有限公司
- 2019-08-28 - 2019-10-29 - C12N9/22
- 本发明提供了一种限制性内切酶SmaI的表达纯化方法，所述方法包括以下步骤：构建含有限制性内切酶SmaI表达片段的重组工程菌，诱导培养，裂解菌体，纯化回收产物，即得限制性内切酶SmaI；所述纯化的方式包括Ni离子亲和层析、阴离子交换层析或肝素亲和层析中的至少两种的组合。通过多种纯化方式的组合，得到纯度大于98％的限制性内切酶SmaI。
- 一种桔青霉发酵产核酸酶P1的生产方法-201510342418.5
- 喻晨;俞学锋;李知洪;姚鹃;吴尧;董先有;李汉文;余华顺 - 安琪酵母股份有限公司
- 2015-06-19 - 2019-10-25 - C12N9/22
- 本发明涉及微生物发酵酶制剂领域，具体涉及一种桔青霉发酵产核酸酶P1的生产方法。包括如下步骤：(1)菌种活化；(2)种子制备：按1～2.5％接种量接入种子摇瓶培养基培养；(3)种子罐培养：按0.1～0.5％接种量接入种子罐培养24～28小时，转速50～150rpm，通风比1:0.5～1:1；(4)发酵罐生产：按3～8％接种量接入发酵罐培养100～200小时，转速100～200rpm，通风比1:0.5～1:1.2，其中发酵45～48小时后流加包含氮源、微量元素和碳源的培养基。该法得到核酸酶的酶活水平达3000～4100u/ml，解决了目前核酸酶生产水平低，成本高的问题，具有大规模工业化的价值。
- 热稳定的Cas9核酸酶-201780086540.8
- 约翰·万德奥斯特;理查德·范克拉嫩堡;艾勒克·芬纳·博斯马;扬尼斯·莫加科斯;普拉塔纳·莫汉拉朱 - 瓦赫宁根大学;科学技术基金会
- 2017-08-16 - 2019-10-25 - C12N9/22
- 热稳定的Cas9核酸酶。本发明涉及遗传工程领域，并且更特别地涉及核酸编辑和基因组修饰。本发明提供了一种分离的Cas蛋白或其多肽片段，所述分离的Cas蛋白或其多肽片段具有SEQ ID NO:1的氨基酸序列或与SEQ ID NO:1具有至少77％同一性的序列。Cas蛋白或多肽能够在20℃和100℃的范围中(包括端点)的温度结合、裂解、标记或修饰双链靶多核苷酸。本发明还提供了编码所述Cas9核酸酶的分离的核酸分子、表达载体和宿主细胞。本发明还提供了被Cas蛋白或多肽识别的PAM序列。本文所公开的Cas9核酸酶提供了通常用于(特别是，在升高的温度)进行遗传工程的新型工具，并且在嗜热生物体(特别地，微生物)的遗传操作中具有特别的价值。
- 功能化氧化石墨烯高效运载CRISPR/Cas9用于基因编辑的方法-201710719879.9
- 周小明;邢达;乐花花 - 华南师范大学
- 2017-08-21 - 2019-10-22 - C12N9/22
- 本发明公开一种功能化氧化石墨烯高效运载CRISPR/Cas9用于基因编辑的方法。本发明的NGO‑PEG‑PEI/Cas9/sgRNA复合体是将氨基化PEG和PEI共价修饰到氧化石墨烯上，得到NGO‑PEG‑PEI；然后将Cas9蛋白和sgRNA在室温条件下组装成Cas9/sgRNA复合体；将NGO‑PEG‑PEI与Cas9/sgRNA复合体在室温条件下进行混合得到。将该复合体与靶基因进行混合，实现靶基因的编辑。本发明中功能化GO具有生物相容性好，负载效率高的的特点，能够高效运载Cas9/sgRNA复合体进细胞来执行其功能；且具有保护Cas9/sgRNA复合体免于酶降解的功能，稳定性高。
- 热稳定的Cas9核酸酶-201780086541.2
- 约翰·万德奥斯特;理查德·范克拉嫩堡;艾勒克·芬纳·博斯马;扬尼斯·莫加科斯;普拉塔纳·莫汉拉朱 - 瓦赫宁根大学;科学技术基金会
- 2017-08-16 - 2019-10-18 - C12N9/22
- 本发明涉及遗传工程领域，并且更特别地涉及核酸编辑和基因组修饰。本发明提供了一种分离的Cas蛋白或其多肽片段，所述分离的Cas蛋白或其多肽片段具有SEQ ID NO:1的氨基酸序列或与SEQ ID NO:1具有至少77％同一性的序列。Cas蛋白或多肽能够在20℃和100℃的范围中(包括端点)的温度结合、裂解、标记或修饰双链靶多核苷酸。本发明还提供了编码所述Cas9核酸酶的分离的核酸分子、表达载体和宿主细胞。本发明还提供了被Cas蛋白或多肽识别的PAM序列。本文所公开的Cas9核酸酶提供了通常用于(特别地，在升高的温度)进行遗传工程的新型工具。
- PCSK9的基因编辑-201780087049.7
- J.P.麦安蒂;D.R.刘 - 哈佛大学的校长及成员们
- 2017-12-22 - 2019-10-18 - C12N9/22
- 本文提供了将功能丧失突变引入到参与LDL‑R介导的胆固醇清除途径的蛋白质因子(例如PCSK9、APOC3、LDL‑R或IDOL)中的系统、组合物和方法。可以使用其中描述的基于CRISPR/Cas9的核碱基编辑器引入功能丧失突变。本文进一步提供了治疗与高循环胆固醇水平相关的状况的组合物和方法。
- 一种高稳定型MazF突变体及其应用-201710092367.4
- 车永胜;杜现礼;熊建伟;陈依军 - 中国人民解放军军事医学科学院毒物药物研究所;中国药科大学
- 2017-02-21 - 2019-10-11 - C12N9/22
- 本发明公开了一种高稳定型MazF突变体及其应用。本发明提供了一种蛋白质，为如下1)或2)：1)所示的蛋白为将野生型MazF蛋白氨基酸序列中第48位半胱氨酸置换为丙氨酸、苯丙氨酸、亮氨酸或异亮氨酸，得到的蛋白；2)所示的蛋白为将1)所示蛋白的氨基酸序列末端添加标签序列且由1)衍生的蛋白质。本发明的实验证明了，突变体在野生型序列48位发生氨基酸替换，该突变体在保持了野生型MazF毒蛋白相当的核酸内切酶活性的条件下，有效提高了活性保持时间与结构稳定性。该突变体可用于各类基于mazEF毒素‑抗毒素系统建立的合成生物学模块，在细菌TAs自杀机制研究、抗菌及抗病毒具有广泛应用。
- 使用工程化的核酸酶调控基因表达-201780050637.3
- J·C·米勒;E·J·瑞巴 - 桑格摩生物治疗股份有限公司
- 2017-08-24 - 2019-10-11 - C12N9/22
- 本公开属于基因组工程化，特别是造血细胞的基因组的靶向修饰的领域。
- 热稳定的Cas9核酸酶-201680092098.5
- 约翰·万德奥斯特;理查德·范克拉嫩堡;艾勒克·芬纳·博斯马;扬尼斯·莫加科斯 - 瓦赫宁根大学;科学技术基金会
- 2016-12-14 - 2019-10-08 - C12N9/22
- 热稳定的Cas9核酸酶。本发明涉及遗传工程领域，并且更特别地涉及核酸编辑和基因组修饰。本发明提供了分离的Cas蛋白或其多肽片段，所述分离的Cas蛋白或其多肽片段具有SEQ ID NO:1的氨基酸序列或与SEQ ID NO:1具有至少77％同一性的序列。Cas蛋白或多肽能够在30℃和100℃的范围中(包括端点)的温度结合、裂解、标记或修饰双链靶多核苷酸。本发明还提供了编码所述Cas9核酸酶的分离的核酸分子、表达载体和宿主细胞。本发明还提供了被Cas蛋白或多肽识别的PAM序列。本文所公开的Cas9核酸酶提供了用于在升高的温度进行遗传工程的新型工具，并且在嗜热生物体(特别地，微生物)的遗传操作中具有特别的价值。
- 用于增强的安全性的自限制性Cas9回路（SLiCES）质粒及其慢病毒系统-201780074367.X
- A·切雷塞托;A·卡西尼;G·佩特里斯 - 阿利亚治疗有限公司
- 2017-10-12 - 2019-10-08 - C12N9/22
- 本发明描述了用于增强的安全性的自限制性Cas9回路(SLiCES)，其由用于化脓性链球菌Cas9(SpCas9)的表达单元、第一Cas9自靶向sgRNA和靶向选择的基因组基因座的第二sgRNA组成。所述自限制性回路通过控制Cas9水平导致增加的基因组编辑特异性。对于其体内利用，SLiCES被经由回路抑制整合到慢病毒递送系统(lentiSLiCES)中以实现病毒颗粒产生。在将其递送到靶细胞后，lentiSLiCES回路被打开以编辑预期的基因组基因座，同时通过SpCas9失活增加其自身中和。通过保护靶细胞免于残留的核酸酶活性，本打了就跑系统增加了基因组编辑的安全系数。
- 利用拆分Cas系统进行基因编辑和表达调控方法-201610341363.0
- 谢震;马大程;彭曙光 - 清华大学
- 2016-05-20 - 2019-09-27 - C12N9/22
- 本发明公开了利用拆分Cas系统进行基因编辑和表达调控方法。本发明提供了蛋白组，将Cas9蛋白氨基酸序列从第不同位点拆分，形成两段蛋白组成蛋白组；本发明的实验证明了，Intein介导的拆分的Ca9系统可以高效的实现基因编辑与基因线路的转录激活调控。本发明提供了运用拆分的Cas9系统结合肿瘤细胞特异性启动子可以进行膀胱癌细胞特异性检测。
- 一种核糖核酸酶及其衍生物和/或变体及其应用-201610693891.2
- 关武祥;解举民 - 中国科学院武汉病毒研究所
- 2016-08-18 - 2019-09-24 - C12N9/22
- 本发明涉及生物化学、分子生物学、生物技术领域，具体而言，涉及一种核糖核酸酶及其衍生物和/或变体，该核糖核酸酶及其衍生物和/或变体对温度、pH以及离子条件等适应范围较广，而且RNA切割活性较高，弥补了一些RNase酶切条件苛刻的不足，并且反应条件温和，具有很好的商业应用前景与较高的研究价值。
- 一种植物RNA m5C甲基化修饰的系统及方法-201910072821.9
- 王东;刘志红;张月婷;贺热情 - 南昌大学
- 2019-01-25 - 2019-08-23 - C12N9/22
- 本发明公开了一种植物RNA m5C甲基化修饰的系统及方法，使用具有RNA m5C甲基化修饰功能的重组核酸酶dCas13a‑RsmB、dPspCas13b‑RsmB、dPspCas13b‑NOP2及dPspCas13b‑NSUN2对RNA进行胞嘧啶C甲基化修饰，具有高效性和特异性等特点，是一种高效快速的RNA m5C甲基化修饰系统。
- 用于切割靶DNA的组合物及其用途-201910137869.3
- 金进秀;曹承于;金素贞;J·M·金;金爽中 - 基因工具股份有限公司
- 2013-10-23 - 2019-07-30 - C12N9/22
- 本发明涉及真核细胞或生物体中的靶向基因组编辑。更具体地，本发明涉及用于在真核细胞或生物体中切割靶DNA的组合物及其用途，所述组合物包含特异于靶DNA的向导RNA和Cas蛋白质编码核酸或Cas蛋白质。
- TCRα归巢核酸内切酶变体-201780074992.4
- 乔丹·贾儒尔;马克·波格森 - 蓝鸟生物公司
- 2017-10-11 - 2019-07-19 - C12N9/22
- 本公开提供了改进的基因组编辑组合物和编辑TCRα基因的方法。
- 经改变的耐热性DNA聚合酶-201780071770.7
- 小林哲大;新井康广 - 东洋纺株式会社
- 2017-11-13 - 2019-07-16 - C12N9/22
- 提供在核酸扩增法、特别是PCR、RT‑PCR中对于抑制物质的耐受性强、可以通过缩短逆转录反应时间而缩短整个核酸扩增反应时间的DNA聚合酶。一种DNA聚合酶，其特征在于，其为具有逆转录活性且改变了与序列号1或2的第509位或第744位相当的氨基酸中的至少1个的DNA聚合酶，特别是与序列号1或2中的第509位或第744位相当的氨基酸的改变是置换为组氨酸、赖氨酸或精氨酸。
- RNA指导的核酸修饰酶及其使用方法-201780074116.1
- J·A·多德纳;J·F·班菲尔德;D·伯斯坦;L·B·哈林顿;S·C·斯图特 - 加利福尼亚大学董事会
- 2017-09-28 - 2019-07-16 - C12N9/22
- 本公开提供CasX蛋白、编码所述CasX蛋白的核酸，以及包含所述CasX蛋白和/或编码所述CasX蛋白的核酸的经修饰的宿主细胞。CasX蛋白可用于提供的各种应用中。本公开提供与所述CasX蛋白结合并提供针对所述CasX蛋白的序列特异性的CasX指导RNA，编码所述CasX指导RNA的核酸，以及包含所述CasX指导RNA和/或编码所述CasX指导RNA的核酸的经修饰的宿主细胞。CasX指导RNA可用于提供的各种应用中。本公开提供古细菌Cas9多肽和编码所述古细菌Cas9多肽的核酸，以及它们的相关联的古细菌Cas9指导RNA和编码所述古细菌Cas9指导RNA的核酸。
- 对乙肝病毒基因组中的识别序列特异性的工程化大范围核酸酶-201780074346.8
- D·扬茨;J·J·史密斯 - 精密生物科学公司
- 2017-10-13 - 2019-07-16 - C12N9/22
- 本发明包括工程化大范围核酸酶，其识别并切割至少两种基因型的乙肝病毒(HBV)的基因组的开放阅读框(ORF)内的识别序列。本发明还包括在药物组合物中和用于治疗或减轻HBV感染症状或者治疗肝细胞癌(HCC)的方法中使用这些工程化大范围核酸酶的方法。此外，本发明包括包含工程化大范围核酸酶蛋白的药物组合物、编码工程化大范围核酸酶的核酸以及这种组合物用于治疗HBV感染或HCC的用途。
- 一种AsCpf1突变体蛋白、编码基因、重组表达载体及其制备方法与应用-201710586386.2
- 不公告发明人 - 江苏溥博生物科技有限公司
- 2017-07-18 - 2019-07-05 - C12N9/22
- 本发明公开了一种AsCpf1突变体蛋白、编码基因、重组表达载体及其制备方法与应用。该AsCpf1突变体蛋白为序列1所示的氨基酸序列组成的蛋白质；其编码基因是序列2所示的DNA分子；含有所述编码基因的重组表达载体是以序列2所示的AsCpf1(S589Q/P711T)为模板设计引物进行PCR扩增，再将纯化的PCR产物用无缝克隆方法插入pET15b载体的多克隆位点NcoI和XhoI之间得到；本发明的AsCpf1突变体蛋白及其编码基因、重组表达载体可用于基因编辑原代T细胞PD‑1。利用本发明的AsCpf1突变体蛋白能够实现原代T细胞PD‑1的敲降，为基因编辑T细胞PD‑1基因及癌症免疫治疗打下基础。
- 植物中的靶向基因组优化-201780072227.9
- K·达伦;E·博西尔 - 巴斯夫农业种子解决方案美国有限责任公司
- 2017-09-19 - 2019-07-05 - C12N9/22
- 提供用核苷酸向导DNA修饰多肽(如RNA向导内切核酸酶)、向导多核苷酸和用于修复双链断裂的供体分子，以靶向方式在预先选定的位点处修饰植物细胞基因组的改进方法和手段。
- 基因组编辑-201780047013.6
- J·弗雷登斯;王开航;J·W·钦 - 英国研究与创新基金会
- 2017-07-27 - 2019-06-28 - C12N9/22
- 本发明涉及一种方法，包括：a)提供宿主细胞所述宿主细胞包括附加型复制子，所述附加型复制子包括供体核酸序列，所述宿主细胞还包括靶标核酸，b)提供能够在所述宿主细胞中支持核酸重组的辅助蛋白c)提供能够在所述宿主细胞中支持核酸切除的辅助蛋白和/或RNA其中所述供体核酸序列依次包括：5'‑同源重组序列1‑感兴趣的序列‑同源重组序列2‑3'其中所述感兴趣的序列包括正选择标记d)诱导所述供体核酸序列的切除e)孵育以允许切除的供体核酸和所述靶标核酸之间的重组f)选择已将所述供体核酸掺入所述靶标核酸的重组体。还描述了核酸和细胞。
- 39E DNA酶及其应用-201811452960.6
- 向宇;冯梦莉;陶晶;童爱军 - 清华大学
- 2018-11-30 - 2019-06-25 - C12N9/22
- 本发明涉及39E DNA酶及其应用，该39E DNA酶具有：左区、核心区以及右区，所述左区的3’端与所述核心区的5’端相连，所述核心区的3’端与所述右区的5’端相连，所述核心区的A20与C21之间连接有连接体，所述连接体通过羟基与A20的磷酸基团相连，所述连接体通过磷酸基团与C21的5’端羟基相连。发明人发现，在A20与C21位点之间插入合适种类与合适长度的连接体时，可显著增加链的柔性，在具有铀酰离子的前提下，显著提高了39E DNA酶链对39S底物链的切割速率，显著降低了对铀酰离子的检出限，同时仍对铀酰离子保持很高的离子选择性。
- 编码Cas9核酸酶的核酸的饮食控制的表达及其用途-201780045274.4
- P·拉瓦萨德;J·马莱特;C·瑟格拉 - 国家医疗保健研究所;大脑与脊髓研究所;国家科学研究中心;索邦大学;法国原子能及替代能源委员会;巴黎公共救济院
- 2017-06-02 - 2019-06-18 - C12N9/22
- 本发明涉及通过Cas核酸酶的基因组编辑。发明人发现Cas核酸酶的表达可以通过使用包含最小启动子和至少一种氨基酸响应元件(AARE)核酸的调节性元件来精细控制，所述调节性元件对缺乏至少一种必需氨基酸的饮食或衣霉素具有响应性。例如，FLAG‑Cas9‑GFP融合体和Cas9‑FLAG‑RFP融合体可以在293T细胞中表达。另外，在携带嘌呤霉素抗性基因的供体质粒存在下，可以在293T细胞基因组上的安全港基因座AASV1的位点处整合所述嘌呤霉素抗性基因。因此，本发明涉及用于在个体中编码Cas核酸酶的核酸的受控表达的核酸，其包含(i)包含最小启动子和1‑20个AARE核酸的调节性多核苷酸，和(ii)编码Cas核酸酶的核酸，其置于所述调节性多核苷酸的控制下。
- 特异识别并修复β地中海贫血症beta-globin基因的嵌合核酸酶-201410730391.2
- 纪家葵;林建飞 - 清华大学
- 2014-12-04 - 2019-06-11 - C12N9/22
- 本发明公开了特异识别并修复β地中海贫血症beta‑globin基因的嵌合核酸酶一种融合蛋白，为将TALE蛋白FokI部分替换成改造后I‑SceI蛋白得到的蛋白；所述TALE蛋白的氨基酸序列为序列表中序列4；所述改造后I‑SceI蛋白的氨基酸序列为序列表中序列2自N’末端第706‑740位氨基酸。本发明实验显示TALE‑ISceI融合酶在临床应用上的优势，展示应用TALE‑Iscel融合酶根治β‑地中海贫血病的可行性。
- 用于进行同源重组的方法、宿主细胞和试剂盒-201810875866.5
- Y·张;J·付;F·斯图尔特 - 基因桥有限责任公司
- 2011-06-10 - 2019-05-31 - C12N9/22
- 本发明涉及用于进行同源重组的方法、宿主细胞和试剂盒，一种用于在共享至少一段同源序列的第一核酸分子和第二核酸分子之间进行同源重组的方法，一种提高同源重组效率的方法。
- 可编程CAS9-重组酶融合蛋白及其用途-201780062152.6
- D.R.刘;B.柴金德;J.L.贝森 - 哈佛大学的校长及成员们
- 2017-08-09 - 2019-05-24 - C12N9/22
- 本公开的一些方面提供了融合蛋白，其包含引导核苷酸序列‑可编程DNA结合蛋白域(例如，Cas9的核酸酶无活性变体，例如dCas9)、任选的接头和重组酶催化域(例如，酪氨酸重组酶催化域或丝氨酸重组酶催化域，例如Gin重组酶催化域)。该融合蛋白可以重组含有侧翼为引导RNA指定序列的最小重组酶核心位点的DNA位点。本公开代表朝向不依赖于内源性细胞机制或细胞状态的在未修饰的细胞中的可编程无痕基因组编辑的步骤。
- 专利分类
