[发明专利]蛋白酶变体及其用途在审
| 申请号： | 201780086905.7 | 申请日： | 2017-12-19 |
| 公开（公告）号： | CN110312795A | 公开（公告）日： | 2019-10-08 |
| 发明（设计）人： | L·M·巴别;L·丹克梅椰尔;D·A·埃斯特尔;F·格德埃格伯;T·卡佩尔;H·穆尔德;S·普莱斯鲁斯 | 申请（专利权）人： | 丹尼斯科美国公司 |
| 主分类号： | C12N9/64 | 分类号： | C12N9/64;C12N9/54 |
| 代理公司： | 北京市中咨律师事务所 11247 | 代理人： | 张莉;黄革生 |
| 地址： | 美国加利*** | 国省代码： | 美国;US |
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| 摘要： | 本文公开了一种或多种枯草杆菌蛋白酶变体、编码其的核酸以及与其生产和使用有关的组合物和方法，所述一种或多种枯草杆菌蛋白酶变体包括与一种或多种参比枯草杆菌蛋白酶相比具有改善的稳定性和/或污垢去除性的一种或多种枯草杆菌蛋白酶变体。 | ||
| 搜索关键词： | 枯草杆菌蛋白酶变体 枯草杆菌蛋白酶 蛋白酶变体 污垢 参比 核酸 去除 生产 | ||
【主权项】：
1.一种枯草杆菌蛋白酶变体，其包含在对应于选自以下的SEQ ID NO:17位置的一个或多个位置处包含一个或多个氨基酸取代的氨基酸序列：(i)1A/C/D/E/G/H/I/K/M/N/R/S/T/V、9R、15T、21A/C/D/E/F/G/H/K/L/M/N/P/Q/R/S/T/V/W/Y、38A/C/D/E/F/G/H/I/L/M/N/P/Q/R/V、40A/C/D/E/F/G/M/N/P/Q/R/T/Y、48C/D/E/I/K/M/N/P/Q/R/S/T/V/Y、58C/D/E/F/G/H/I/K/L/M/N/P/Q/R/S/V/W/Y、76A/C/D/E/F/G/H/I/K/L/M/Q/T/V/Y、82A/C/E/F/G/H/K/L/M/N/P/Q/R/S/T/W/Y、87A/C/D/E/F/G/H/I/L/M/Q/T/V/W、89A/C/D/F/G/H/L/M/N/P/Q/R/S/V/W、99A/D/G/S、101A/D/E/F/G/H/I/K/L/M/N/Q/S/T/V/W/Y、116A/C/D/E/F/G/H/K/L/M/N/Q/R/S/V、118D/R、128A/D/E/H/I/L/M/N/Q/T/V/Y、129C/E、130A/C/D/E/G/H/I/K/L/M/N/P/Q/R/S/T/V/Y、163S、170S、194P、205I、206C/L、218D、245R、248A/C/E/F/G/H/I/K/L/M/Q/S/T/V/W/Y、和255R；(ii)1S、21E/F/G/M/N/P/Q/R/S/T、38C/D/F/G/L/P、40A/C/D/G/M/N、48P/Q/T、58C/D/F/M/Q/R、76A/D/F/G/H/I/K/L/M/Q/T/V/Y、82C/M/R/T/Y、87D/Q、89C/R、101D/E/M、116D/E/H/N/R、128D/E/N/Q/V、129C、130D/E/G/V、和248T；(iii)1D/E/M/N/S、21A/C/D/F/G/L/M/N/P/Q/R/S/V/W/Y、38A/D/F/G/L/M/N/P/Q/R、40A/C/D/F/G/M/N/P/Q/R、48K、58L/M/P/Q/R/S/W/Y、76A/D/F/K/M/Q、82A/C/F/K/M/N/R/T/Y、87A/C/D/E/F/G/H/M/Q、89C/F/H/L/N/P/Q/R/S/V/W、101M、116A/C/D/E/F/H/M/N/R、128A、129E、130G、和248A/F/H/Q/T；(iv)21F/M/N/P/Q/R/S、38D/F/G/P、40G/M、58R、76A/D/F、82M/R、89C/R、和116H/N/R；(v)1C/E/S/T/V、21E/G/Q/S/T/V、38C/D/E/G/H/I/L/V、40A/C/D/E/G/N/Q/T/Y、48C/D/E/I/N/P/Q/S/T/V/Y、58C/D/E/F/G/I/K/M/Q/V、76A/C/D/E/F/G/H/I/L/M/T/V/Y、82C/E/G/H/N/P/Q/R/S/T/W/Y、87A/C/D/I/L/M/Q/T/V/W、89C、101A/D/E/G/H/I/K/L/M/N/Q/S/T/V、116C/D/E/G/H/N/V、128D/E/H/L/M/N/Q/T/V/Y、129C、130C/D/E/G/H/I/L/M/N/P/Q/S/T/V/Y、和248A/C/E/G/Q/S/T/V；(vi)21E/T、38C/D/G/L、40D/G、48P/Q/T、58D/F、76D/G/H/I、82T/Y、87D/Q、89C、101D/E、116D/E/H/N、128D/E/N/Q/V、129C、130D/E/G/V、和248T；(vii)1C/D/E/F/I/K/L/M/N/P/V/Y、21A/E/G/H/K/L/M/N/P/S/T/V/W/Y、38C/D/E/H/I/L/P/Q/V/Y、40A/C/D/G/H/I/M/P/Q/T/V/Y、48E/G/H/I/T/Y、58A/C/D/E/F/G/H/I/K/M/S/V、76A/C/D/E/G/H/I/K/L/M/P/S/T/V/W/Y、82A/C/E/G/H/K/M/N/P/Q/R/S/T/W/Y、87A/C/D/F/H/I/K/L/M/P/Q/T/V/W/Y、89C/H/K/N/P/V、101D/E/F/I/K/L/M/N/Q/T/V/Y、116A/C/D/E/G/K/L/N/R/S/V、128A/D/F/H/I/K/L/M/N/Q/T/V/W/Y、129C、130D/E/G/H/I/K/M/N/Q/S/T/W/Y、和248A/E/G/L/Q/T/V；(viii)1K、21K/M/T、38D/V、58G/K/V、76C/I/K、82G/M/P/S/T/Y、87C、89C、116A/D、128A/D/I/K/L/N/Q/V、129C、和130E/S/T；(ix)1C/D/E/I/L/M/T/Y、21A/C/D/E/G/L/M/N/R/W/Y、38A/C/D/E/G/H/I/L/M/N/P/S/T/V/W/Y、40A/C/D/E/G/I/K/L/M/T/V/W/Y、48C/D/E/G/H/I/M/N/P/Q/S/T/V/Y、58A/C/D/E/G/I/K/L/M/N/P/Q/R/S/V/Y、76A/C/D/E/G/H/L/M/P/Q/S/T/V/Y、82C/D/E/F/H/K/L/M/N/P/Q/S/T/V/Y、87A/C/D/E/F/G/H/K/L/M/N/P/Q/S/T/V/W/Y、89A/C/D/E/M/N/Y、101A/D/E/F/G/H/I/K/L/M/N/Q/S/T/V/Y、116A/C/D/E/G/H/I/K/L/M/N/Q/S/V/Y、128A/D/K/N/Q/T/W/Y、129C、130C/D/E/G/H/I/K/L/M/N/P/Q/S/T/V/W/Y、和248A/C/D/E/G/H/I/K/L/Q/S/T/V/Y；(x)1T、21C/D/E/L、38C/D/E/G/I/L/M/V、40D/E/I/L/V、48C/D/E/P/V/Y、58C/D/G/I/K/V/Y、76C/D/E/P/T/Y、82S/T/V/Y、87C/D/E/G/P、89C、101A/D/E/L/M/N/T/V、116A/D/E/H/I/L/N/Y、128D/T、129C、130/D/E/G/L/Q/S/T/V、和248G/T；(xi)1C/D/E、21C/D/E/R、38C/D/E/G/I/M/S/T、40C/D/E/L、48C/D/E/I/S/V/Y、58A/C/D/E/K、76A/C/D/E/T、82E/S、87C/D/E/N、89C、101A/D/E/G/H/I/L/M/N/Q/S/T/V、116A/C/D/E、128D/T/W/Y、129C、130C/D/E/G/H/I/K/L/N/S/T/V/W/Y、和248C/D/E/G/H/I/K/L/Q/T/V/Y；(xii)21D、38C/D/E、40D、48E、58C、76D/E/T、87C/D、89C、101D/E、116D/E、和130D/E/G；(xiii)1C/H/K/L/S/T/Y、38D/E/G/H/I/K/L/M/N/P/V、40A/C/D/E/F/I/M/P/R、48C/G/I/M/N/Q/T/W/Y、58I/P/S/V、76A/C/D/F/P/Q/S、87A/C/D/L/M/T、89C/F/G/M/N/Q/S、101C/E/F/H/M/N/P/S/T、116D/E/F/G/H/I/L/N/S/V/W/Y、128F/I/M、129C、130C/D/E/G/H/M/N/P/Q/R/S/T/V、和248C/D/G/L/S/W；(xiv)38D/E/P、40C/M、76P、89C/G/M、101E/N、116H/I、128M、和130G；(xv)21E/L、38C/D/E/G/H/V、40D、48C/E、58K、76A/C/D/E/G/T、82S、87C、89C、101D/e/M/N、116A/C/D/E、128K/T/W/Y、130D/G/H/I/K/L/N/S/Y、和248E/G/I/K/Q/T/Y(xvi)87C、89C、116A/D、和130G；(xvii)38D/E/G/H、48C、76A/C、87C、89C、101D/E/N、116D/E、130G、130H、130N、130S、和248G；(xviii)38D/E/G/I/M、40C/D/E、48C、76A/C/D、87C/D、89C、101E/M/N/S/T、116D/E、128T、130C/D/E/G/H/N/S/T、和248C；或(xix)(i)至(xviii)的组合；其中所述变体的氨基酸位置通过与SEQ ID NO:17的氨基酸序列相对应来编号。
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- 2016-04-05 - 2019-05-03 - C12N9/64
- 本发明提供了一种泛素特异性蛋白酶49在制备预防或者治疗胰腺导管癌的药物中的用途，所述的去泛素特异性蛋白酶49的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。本发明提供了与FKBP5蛋白相互作用的去泛素化酶USP49，明确了FKBP5蛋白降解和稳定的机制，及其对FKBP5‑AKT通路的分子调控，提供了该通路在胰腺癌发生发展过程中的作用及分子机制，为胰腺癌的治疗提供新的基础依据，对胰腺癌的个性化医疗具有直接的指导意义。
- 一种保存白眉蛇毒血凝酶浓缩液的方法-201610975567.X
- 王鹏;修元澎;余江天 - 锦州奥鸿药业有限责任公司
- 2016-11-07 - 2019-04-23 - C12N9/64
- 本发明提供一种保存白眉蛇毒血凝酶浓缩液的方法，包括：向收集好的白眉蛇毒血凝酶浓缩液中加入CaCl2溶液，以每1分钟0.5℃以下的速率降温到10℃，在10℃下保存15‑25分钟后，再将温度升到室温；加入甘氨酸溶液，在3.5—4.5℃环境中长久保存。本发明提供的保存白眉蛇毒血凝酶浓缩液的方法能够减少酶的失活，降低成本，同时提高药品的安全性。
- 一种精子顶体酶的提取方法-201910117692.0
- 李明磊;傅剑华;蔡华;曾周祥;蔡栋;庄兴华;邹玮 - 深圳华康生物医学工程有限公司
- 2019-02-15 - 2019-04-12 - C12N9/64
- 本发明提供了一种精子顶体酶的提取方法，所述方法包括以尿素溶液作为萃取剂，采用液‑固萃取技术将精子顶体酶萃取至液体中，并添加了顶体酶稳定剂保持酶的活性；本发明通过优选萃取剂和顶体酶稳定剂，并优化浓度配比，使其不损失酶活的前提下简化操作步骤，使顶体酶保存期达到14天以上；本发明工艺简单，可实现工业化大规模生产，可为企业带来良好的经济效益，具备广阔的前景。
- 一种尖吻蝮蛇凝血酶及其制备方法-201610179525.5
- 邓沁;彭维;王永刚;吴忠 - 中山大学
- 2016-03-25 - 2019-04-02 - C12N9/64
- 本发明公开了一种高活性尖吻蝮凝血酶的制备方法。该方法将蛇毒粗品经超滤膜超滤后通过阴离子柱层析，以磷酸缓冲液洗脱后，再通过分子筛凝胶柱除热源与脱盐，最终得到高活性、高纯度的凝血酶。本发明方法与现有技术相比具有以下优点：该方法适合大规模生产、操作简单、效率高；制备的尖吻蝮属凝血酶产品产率高达8％，纯度高达99％以上，比活力不低于180U/mg。
- 因子X变体-201780041389.6
- A·S·什图鲁;J-L·普兰迪尔;T·阿巴彻 - 法国血液分割暨生化制品实验室
- 2017-05-05 - 2019-03-01 - C12N9/64
- 本发明涉及蛋白质，其是包含SEQ ID No.:1的突变序列的因子X变体，所述蛋白质在其N‑末端包含序列SEQ ID No.：7的信号肽和不同于因子X的天然前肽的前肽。
- 一种天然方格星虫纤溶酶的制备方法及其应用-201810968824.6
- 许瑞安;马国兴;陈磊;崔秀灵 - 许瑞安
- 2018-08-23 - 2019-02-01 - C12N9/64
- 本发明公开了一种天然方格星虫纤溶酶制备方法及其应用。本发明所述方格星虫纤溶酶，其部分氨基酸序列为SEQ ID NO:1所示。本发明方格星虫纤溶酶在抗血栓方面具有非常好的疗效。
- 一种蜂蜜酶系活性物质的提取方法-201810756792.3
- 张治刚;刘胜利;高雪琴;刘庆芬 - 郑州力酷生物科技有限公司
- 2018-07-11 - 2019-01-11 - C12N9/64
- 本发明公开了一种蜂蜜酶系生理活性物质的提取方法,属于酶工程技术领域。通过对原蜂蜜进行纯净水稀释、加热升温、粗滤、精滤、超滤等步骤提纯处理，制得蜂蜜酶系生理活性物质，从而解决了原蜂蜜中生理活性物质浓度低的问题，为糖尿病患者，尿酸高、痛风等患者，肥胖及一些高血脂患者由于蜂蜜高含糖量而不宜食用蜂蜜，而又需要蜂蜜酶系生理活性物质的营养提供健康与康复帮助，同时也为普通人群提供新的健康食源。
- 用于纯化转基因因子VII的方法-201380048473.2
- D·巴塔勒;M·诺格雷;A·S·什图鲁 - 法国血液分割暨生化制品实验室
- 2013-07-18 - 2019-01-08 - C12N9/64
- 本发明涉及一种尤其是用于纯化转基因来源的重组人活化因子VII的抗因子VII亲和配体。组合其他正交色谱步骤的亲和配体允许制备高度纯化的FVII溶液，其完全活化、不含聚集体并具有低百分比的降解或氧化的FVII形式。
- 一种菠萝蛋白酶的提取方法-201810953068.X
- 潘世朝;李志强;刘世亭 - 厦门璞真食品有限公司
- 2018-08-21 - 2018-12-18 - C12N9/64
- 本发明提供了一种菠萝蛋白酶的提取方法，操作步骤为：1)预处理；2)酶解；3)等电点沉淀；4)超滤；5)干燥保存。有益效果为：将菠萝或菠萝茎先进行预冷处理，能减少菠萝蛋白酶酶活力损失；采用的稳定剂能增强酶分子构象的稳定性，提高酶的贮藏稳定性；具有较好的抗氧化性，清除自由基，保护巯基；对重金属具有络合作用，防止重金属抑制菠萝蛋白酶的活性；最后得到的菠萝蛋白酶的酶活力、细菌含量、重金属含量、外观等指标达到或超过医药级标准；操作步骤简单，成本低廉，适合大规模生产。
- 活蝎酶的制备方法-201810949289.X
- 于宗林 - 于宗林
- 2018-08-20 - 2018-12-11 - C12N9/64
- 本发明公开了活蝎酶的制备方法，由消毒、提取、分离、过滤、保存工序组成，包括如下步骤：消毒：提取：分离：过滤：保存；本发明中通过使用10～20ppm优碘素浸泡活蝎10～15秒，活蝎取出后在常温下进行自然干燥1～2小时，使用酒精均匀喷洒活蝎全身，活蝎在常温状态下进行自然干燥1～2小时，使用紫外线杀菌灯对干燥后的活蝎进行再次杀菌消毒，有助于消除活蝎的毒副作用；活蝎中提取了活性蛋白，并可保持活性3‑4年，应用于长体并得到成功地吸收。
- 一种胃蛋白酶提取方法-201710362295.0
- 朱友兵 - 朱友兵
- 2017-05-22 - 2018-12-07 - C12N9/64
- 本发明公开了一种胃蛋白酶提取方法，包含以下步骤：(1)原材料的选择和预处理：取直径10cm，深2‑3mm的胃基底部黏膜；(2)自溶：在夹套锅内预先加水，在加入盐酸，加热至50‑100℃，在搅拌下加入猪胃黏膜，快速搅拌使酸度均匀，保持45‑48度，消化，得自溶液；(3)过滤：用纱布过滤除去未消化的组织尿蛋白，收集滤液；(4)脱脂、去杂质：将滤液降温至30℃以下，加入15‑20％氯仿或乙醚，搅匀后转入沉淀脱脂器内，静置24‑48小时，使杂质沉淀，分出弃去，得脱脂酶液；(5)浓缩、干燥，得成品。本发明可以高效、快速的提取胃蛋白酶。
- 胃膜素、胃蛋白酶联产方法-201810800099.1
- 卢国栋;李凤罗;李晓军;徐金山;倪军 - 江苏普华克胜药业有限公司
- 2018-07-20 - 2018-12-07 - C12N9/64
- 本发明提供一种胃膜素、胃蛋白酶联产方法。本发明的方法包括（1）原料预处理：取猪胃粘膜，绞碎后加入盐酸调节pH在2.6‑2.8，升温到45‑48℃进行消化，消化后过滤并收集滤液；（2）粗提液的制备：在步骤（1）得到的滤液中加入盐酸，搅拌均匀后静置3‑4h,上层清液过滤至澄清得胃蛋白酶清液，收集备用，下层沉淀离心，取离心清液过滤至澄清得胃蛋白酶清液，收集备用，离心后的滤渣备用；（3）胃膜素的制备：用上述离心后的滤渣加入等体积的0~5℃的丙酮，搅拌，静置5‑8h，过滤，得到胃膜素粗品；（4）胃蛋白酶的制备：用上述胃蛋白酶清液浓缩、透析、干燥得胃蛋白酶。本发明提高了操作的安全系数，对工人身体无任何伤害。
- 专利分类
