[发明专利]一种提高烟叶提取物中淀粉酶酶活的提取方法在审
申请号: | 201811346040.6 | 申请日: | 2018-11-13 |
公开(公告)号: | CN109321550A | 公开(公告)日: | 2019-02-12 |
发明(设计)人: | 翟妞;徐国云;周会娜;陈千思;张慧;刘萍萍;郑庆霞;许亚龙;王晨;李晶;卢鹏 | 申请(专利权)人: | 中国烟草总公司郑州烟草研究院 |
主分类号: | C12N9/26 | 分类号: | C12N9/26 |
代理公司: | 郑州联科专利事务所(普通合伙) 41104 | 代理人: | 时立新 |
地址: | 450001 *** | 国省代码: | 河南;41 |
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摘要: | 本申请属于烟草代谢物技术领域,具体涉及一种提高烟叶提取物中淀粉酶(AMS)酶活提取方法专利申请事宜。该方法针对新鲜烟叶中淀粉酶的提取,具体包括:制备提取液(采用裂解液RIPA、缓冲液NEB或PBS)、烟叶预处理、溶液法提取等步骤。初步测定结果表明,经过相关提取工艺参数优化后,提取液中淀粉酶(AMS)酶活得到了较好提高,可达9.7×10‑4U/μg全蛋白,较好达到了减少杂质蛋白干扰、提升AMS酶含量的目的。同时由于相关提取方法简单快速、耗时较短(仅1.5 h左右),因此使得本申请具有较好的科研价值,可为AMS活性分析及其它相关蛋白分析和研究奠定技术基础。 | ||
搜索关键词: | 淀粉酶 酶活 烟叶提取物 提取液 申请 工艺参数优化 烟叶预处理 蛋白分析 活性分析 技术基础 新鲜烟叶 杂质蛋白 代谢物 缓冲液 裂解液 全蛋白 溶液法 制备 耗时 烟草 科研 研究 | ||
【主权项】:
1.一种提高烟叶提取物中淀粉酶酶活的提取方法,其特征在于,该方法针对新鲜烟叶中淀粉酶的提取,具体包括如下步骤:(1)制备提取液,具体采用裂解液RIPA、NEB或PBS;配方组成为:裂解液RIPA :pH 8.0的Tris‑Cl、50 mM,EDTA、1mM,SDS、0.1%,NaCl、150 mM,NP‑40、1%,PMSF、1 mM;缓冲液NEB:pH 7.5 的Hepes、20mM,KCl、40 mM,EDTA、1 mM,PMSF、1 mM;(2)烟叶预处理将烟草8‑12叶期的新鲜烟叶,研磨成粉备用;(3)溶液法提取在步骤(2)研磨成粉烟叶样品中加入步骤(1)中制备的提取液,震荡混匀后,冰上静置不少于1h;具体用量方面,研磨成粉烟叶样品100mg,提取液用量为500μl‑1mL;静置完成后,5000~15000rpm离心不少于20min,保留上清液,即为含有较高淀粉酶酶活的提取液。
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- 张玲;陈忠永 - 漳州市皓康生物科技有限公司
- 2016-12-05 - 2018-06-12 - C12N9/26
- 本发明公开了一种用于提取果胶的原果胶酶制备方法,包括以下步骤:1)富集:取1~5g柑橘园土样加入装有50~100ml富集培养基的三角瓶中;2)筛选:取富集后的培养液多份,将稀释后不同浓度的菌悬液分别涂布于初筛平板上;从初筛平板上挑取形态不同的菌落,在PDA斜面培养基中划线,做好记号,进行保种;从斜面上挑取孢子或菌丝接种到不同的发酵培养基中,摇瓶发酵,取发酵液,测定发酵液中的原果胶酶酶活,筛选出酶活最高的菌株;3)酶液制备:将筛出的菌株接种至优化培养基中,取所得的培养物,离心处理,得到的上清液即为原果胶酶液,采用本发明制备的复合酶液进行果胶提取,果胶几乎没有降解,能够降低环境污染。
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