[发明专利]一种小鼠截短IL-36α蛋白的生产方法有效
| 申请号： | 201910043737.4 | 申请日： | 2019-01-17 |
| 公开（公告）号： | CN109576277B | 公开（公告）日： | 2022-06-14 |
| 发明（设计）人： | 朱俊丰;王媛媛;赵鹏燕;徐莹;阿斯姆古丽.马木提;程瑶;钱炳秀;杨雨晨;李姝娇 | 申请（专利权）人： | 辽宁大学 |
| 主分类号： | C12N15/25 | 分类号： | C12N15/25;C12N15/70;C07K14/545 |
| 代理公司： | 沈阳杰克知识产权代理有限公司 21207 | 代理人： | 金春华 |
| 地址： | 110000 辽宁*** | 国省代码： | 辽宁;21 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种小鼠截短IL‑36α蛋白的生产方法。包括以下步骤：小鼠截短IL‑36α蛋白基因密码子优化与合成；PCR扩增获得小鼠截短IL‑36α片段；构建pET28a‑mIL‑36α重组载体；将pET28a‑mIL‑36α转化大肠杆菌BL21，构建重组工程菌；诱导小鼠截短IL‑36α蛋白表达，该工程菌表达的重组小鼠截短IL‑36α主要为可溶蛋白；用Ni‑NAT对表达的小鼠截短IL‑36α蛋白进行纯化即可得到较高纯度的小鼠截短IL‑36α蛋白。本发明小鼠截短IL‑36α蛋白的成功制备，为探究IL‑36α在各种小鼠炎症疾病模型中的作用及其分子机制奠定了基础。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 小鼠 il 36 蛋白 生产 方法 | ||
【主权项】：
1.一种小鼠截短IL‑36α蛋白的生产方法，其特征在于，包括以下步骤：1)构建pUC57‑mIL‑36α质粒：合成小鼠截短IL‑36α蛋白基因，克隆入pUC57载体质粒，构建pUC57‑mIL‑36α质粒；2)PCR扩增：以P1和P2为特异性引物，在引物的两侧导入NcoⅠ和XhoⅠ酶切位点，以pUC57‑mIL‑36α质粒为模板，进行PCR扩增；所述的特异性引物P1和P2的序列为：P1：5’‑GGGCCATGGGCAGAGCAGCAAGCCC‑3’P2：5’‑CCCCTCGAGATGCACCCACGATCATTTC‑3’3)pET28a‑mIL‑36α重组表达载体的构建：将PCR扩增产物和pET28a载体质粒分别用NcoⅠ、XhoⅠ进行双酶切，双酶切后凝胶回收IL‑36α与pET28a载体，回收后的IL‑36α与pET28a载体经T4连接酶定向连接，构建重组表达载体pET28a‑mIL‑36α；4)转化：将重组表达载体pET28a‑mIL‑36α转化大肠杆菌BL21，获得IL‑36α重组工程菌；5)小鼠截短IL‑36α蛋白的诱导表达：将IL‑36α重组工程菌接种于含卡那霉素的LB培养基中，37℃、200r/min震荡培养过夜；次日，以1:100比例扩大培养，37℃、210r/min震荡培养3h，至OD600达到0.6时，加入终浓度为0.7mmol/L的IPTG，进行诱导表达，获得菌体；6)小鼠截短IL‑36α蛋白的纯化：采用超声破碎法将获得的菌体裂解，离心取上清液，用Ni‑NAT对上清液进行纯化，得纯化的小鼠截短IL‑36α蛋白。
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