[发明专利]抗松材线虫病马尾松胚性愈伤组织超低温保存方法在审
| 申请号： | 201910437126.8 | 申请日： | 2019-05-23 |
| 公开（公告）号： | CN110050784A | 公开（公告）日： | 2019-07-26 |
| 发明（设计）人： | 吴小芹;沈李元;叶建仁;陈婷婷 | 申请（专利权）人： | 南京林业大学 |
| 主分类号： | A01N3/00 | 分类号： | A01N3/00;A01H4/00 |
| 代理公司： | 南京申云知识产权代理事务所(普通合伙) 32274 | 代理人： | 邱兴天 |
| 地址： | 210037 江*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种抗松材线虫病马尾松胚性愈伤组织超低温保存方法，属于组培技术领域。本发明通过适当的预处理与采用混合型冷冻保护剂更适合于抗性马尾松胚性愈伤组织的冷冻保存，且在30‑35℃解冻后的胚性愈伤组织细胞活性最高达100％，超低温保存后的愈伤与正常增殖的愈伤组织在外观及显微结构上无明显差异，且低温保存后的愈伤组织仍具有分化形成体胚的能力。本申请初步建立了抗松材线虫病马尾松胚性愈伤组织的超低温保存体系，为抗性马尾松胚性愈伤组织胚性的长期维持提供了技术参考。 | ||
| 搜索关键词： | 胚性愈伤组织 马尾松 超低温保存 松材线虫病 愈伤组织 抗性 预处理 冷冻保护剂 低温保存 技术参考 冷冻保存 细胞活性 显微结构 组培技术 形成体 增殖的 胚性 愈伤 解冻 分化 申请 | ||
【主权项】：
1.抗松材线虫病马尾松胚性愈伤组织超低温保存方法，其特征在于，包括以下步骤：1)马尾松细胞系的胚性愈伤组织置于含有蔗糖的增殖培养基中预处理12～48h；2)预处理后的胚性愈伤组织置于冷冻管中，加入冷冻保护剂，进行程序降温，温度降至‑80℃后取出冷冻管并迅速投入液氮，进行超低温保存；其中，冷冻保护剂的组分和浓度为：DMSO浓度为0～10％，蔗糖浓度0～0.5mol/L，PEG4000浓度为0～15％，DMSO、蔗糖和PEG4000中任意两个组分浓度不同时为0；3)使用时，取超低温保存胚性愈伤组织水浴温度为30℃～40℃条件下进行解冻，待冰完全溶化后立即将冷冻管取出。
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