[发明专利]一种ips细胞提取物的提取方法及利用ips细胞提取物逆转衰老的间充质干细胞的方法

摘要

本发明公开了一种逆转衰老的间充质干细胞的制备方法，包括以下步骤：S1：将诱导多能干细胞的细胞提取物加入至间充质干细胞培养基，充分混匀，使细胞提取物的浓度达到100ug/ul；S2：取成人的牙源性间充质干细胞，将其添加至间充质干细胞必需培养基中培养至衰老代数，随后将其添加至间充质干细胞必需培养基中，进行培养；S3：待间充质干细胞达到80%融合度后进行传代，继续加ips细胞提取物培养3天，得到逆转衰老的间充质干细胞；本发明在衰老的间充质干细胞中加入诱导多能干细胞的细胞提取物，激活衰老间充质干细胞内相关胚胎干细胞基因表达，从而逆转间充质干细胞的衰老状态，使其回到年轻状态，从而保证了间充质干细胞的治疗效果。

主权项

1.一种诱导多能干细胞的细胞提取物的提取方法，其特征在于：包括以下步骤：S1：将诱导多能干细胞接种在添加有培养基的第一培养板上，在显微镜下观察细胞的生长状态；S2：当诱导多能干细胞克隆生长至80%融合度时，用磷酸盐缓冲液清洗诱导多能干细胞两次，然后添加传代试剂，随后将培养板放置在细胞培养箱中，进行孵育；S3：在孵育7分钟后，取出培养板，吸出传代试剂，然后加入培养基清洗诱导多能干细胞两次，再添加2ml培养基，轻轻吹打后吸出细胞，分散至第二培养板中进行克隆；S4：待细胞铺满培养板80%时，采用磷酸盐缓冲液冲洗细胞两次，并用胰酶消化细胞，反复吹打后加入离心机中，离心后取上清液置于‑80℃中保存，隔夜后迅速取出，置于室温中融化，再取上清液置于‑80℃中保存，隔夜后迅速取出，置于室温中融化，之后再一次取上清液置于‑80℃中保存，隔夜后迅速取出，置于室温中融化，再加入离心机中，离心15min，取上清液，得到诱导多能干细胞的细胞提取物；S5：将诱导多能干细胞的细胞提取物于‑80℃保存，即用即取。