[发明专利]一种突触前膜分离方法在审
| 申请号： | 201910528361.6 | 申请日： | 2019-06-18 |
| 公开（公告）号： | CN110331133A | 公开（公告）日： | 2019-10-15 |
| 发明（设计）人： | 石天尧;冯书芳;周文霞;张永祥 | 申请（专利权）人： | 中国人民解放军军事科学院军事医学研究院 |
| 主分类号： | C12N5/079 | 分类号： | C12N5/079 |
| 代理公司： | 北京丰浩知识产权代理事务所(普通合伙) 11781 | 代理人： | 钟国 |
| 地址： | 100850*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种突触前膜分离方法，该方法包括如下步骤：将离体脑组织置于蔗糖‑HEPES缓冲液中匀浆后，于1000g下离心，所得上清液再于12000g下离心，得到的沉淀P2用EDTA‑HEPES缓冲液重悬，于12000g下离心，得到的沉淀P3用Tritonx‑100‑NaCl‑HEPES缓冲液重悬，于12000g下离心，所得上清液再于50000g下离心，得到的沉淀P6用Tris‑HCl缓冲液重悬，于10000g下离心，得到主要是突触前膜成分的上清液S7。与现有技术相比，本发明的方法不需要制备密度梯度介质溶液，操作更为简单，对脑中小核团的样本组织同样适用。 | ||
| 搜索关键词： | 上清液 突触 沉淀 膜分离 重悬 密度梯度介质 缓冲液重 样本组织 脑组织 蔗糖 核团 离体 匀浆 制备 | ||
【主权项】：
1.一种突触前膜分离方法，包括如下步骤：(1)将离体脑组织置于缓冲液A中匀浆后，于1000g下离心，所得上清液再于12000g下离心，得到沉淀P2；(2)沉淀P2用缓冲液B重悬，于12000g下离心，得到沉淀P3；(3)沉淀P3用缓冲液C重悬，于12000g下离心，所得上清液再于50000g下离心，得到沉淀P6；(4)沉淀P6用缓冲液E重悬，于10000g下离心，得到主要是突触前膜成分的上清液S7；其中，所述缓冲液A为pH＝7.4的蔗糖‑HEPES缓冲液，蔗糖浓度为0.32M，HEPES浓度为10mM；所述缓冲液B为pH＝7.4的EDTA‑HEPES缓冲液，EDTA浓度为1mM，HEPES浓度为4mM；所述缓冲液C为pH＝7.2的Tritonx‑100‑NaCl‑HEPES缓冲液，NaCl浓度为100mM,Tritonx‑100浓度为0.5vt％，HEPES浓度为20mM；所述缓冲液E为25mM Tris‑HCl缓冲液，pH＝7.6。
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