[发明专利]构建多点突变核酸序列的方法有效
| 申请号： | 201910648862.8 | 申请日： | 2019-07-18 |
| 公开（公告）号： | CN110305861B | 公开（公告）日： | 2021-04-09 |
| 发明（设计）人： | 张宏涛;张嘉美;彭亮;马秋燕;李蔚芝;邓梦林 | 申请（专利权）人： | 深圳市菲鹏生物治疗股份有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/10 | 分类号： | C12N15/10 |
| 代理公司： | 北京超凡宏宇专利代理事务所(特殊普通合伙) 11463 | 代理人： | 王焕 |
| 地址： | 518000 广东省深圳市前海深港合作区前*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种构建多点突变核酸序列的方法，涉及基因工程技术领域。本发明公开的构建多点突变核酸序列的方法利用依赖于甲基化的限制性内切酶和5‑甲基dCTP等来达到快速构建基因多点突变。该方法可以快速、便捷地构建出具有多点突变核酸序列。 | ||
| 搜索关键词： | 构建 多点 突变 核酸 序列 方法 | ||
【主权项】：
1.一种构建多点突变核酸序列的方法，其特征在于，其包括：步骤a：利用具有第一突变位点的第一引物扩增目标核酸分子，得到第一产物；其中，所述目标核酸分子为双链环状结构且具有甲基化位点；步骤b：利用依赖于甲基化的限制性核酸内切酶处理所述第一产物，得到不具有甲基化位点的第二产物；步骤c：利用具有第二突变位点的第二引物扩增所述第二产物，得到第三产物；其中，在扩增时，所用的dCTP为5‑甲基dCTP；步骤d：消化所述第三产物中的仅具有第一突变但不具有甲基化位点的单链环状结构的核酸分子，得到第四产物。
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