[发明专利]高通量单细胞转录组与基因突变整合分析方法在审
| 申请号： | 201910932328.X | 申请日： | 2019-09-29 |
| 公开（公告）号： | CN110577983A | 公开（公告）日： | 2019-12-17 |
| 发明（设计）人： | 李金泽;周连群;张芷齐;张威;郭振;李传宇;姚佳;李超 | 申请（专利权）人： | 中国科学院苏州生物医学工程技术研究所 |
| 主分类号： | C12Q1/6827 | 分类号： | C12Q1/6827;C12Q1/6837 |
| 代理公司： | 11369 北京远大卓悦知识产权代理事务所(普通合伙) | 代理人： | 张川 |
| 地址： | 215163 江苏*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种高通量单细胞转录组与基因突变整合分析方法，包括以下步骤：1)提供一种高通量单细胞编码芯片；2)进行单细胞表面蛋白分型分析；3)单细胞转录组突变分析；4)建立单细胞表面蛋白分型与突变整合分析的数据库；5)建立高通量单细胞转录组与基因突变整合分析模型。本发明的高通量单细胞转录组与基因突变整合分析方法，通过设计具有微孔空间坐标、细胞核酸标签和分子核酸标签的三重编码技术的高通量单细胞编码芯片，结合单细胞表面蛋白分型、单细胞转录组突变分析及基因测序的方式，可将单细胞的基因突变、转录组和蛋白表达信息一一对应起来，形成高通量单细胞转录组与基因突变整合分析的完整数据库，获得多组学整合分析模型。 | ||
| 搜索关键词： | 转录组 高通量 整合 基因突变 表面蛋白 分型 编码芯片 分析模型 突变分析 分析 标签 完整数据库 编码技术 蛋白表达 分子核酸 基因测序 空间坐标 细胞核酸 微孔 组学 突变 数据库 | ||
【主权项】：
1.一种高通量单细胞转录组与基因突变整合分析方法，其特征在于，包括以下步骤：/n1)提供一种高通量单细胞编码芯片，所述芯片具有多个微孔，每个所述微孔具有唯一的空间坐标编码，且所述微孔内修饰有若干条用于捕获目标RNA的核酸序列，所述核酸序列包括用于标示RNA源自的细胞的细胞标签和用于标示结合的RNA的分子标签，每个微孔的细胞标签与空间坐标编码一一对应；/n2)利用所述芯片的微孔捕获单细胞，通过荧光成像进行各个微孔位置的单细胞表面蛋白分型分析；/n3)对微孔中的单细胞进行原位裂解扩增，逆转录合成携带细胞标签、分子标签的cDNA，游离cDNA收集后用于单细胞转录组分析，固定在微孔内的cDNA序列用于基因突变分析；/n4)针对固定在微孔内的cDNA进行PCR扩增，并对目的基因的野生型和突变型进行双色荧光标记，然后通过双色荧光图像分析，计算各微孔位置的野生型与突变型的比例，得到单细胞的基因突变表达信息；/n5)将相同位置的单细胞表面蛋白分型信息与扩增后的单细胞基因突变表达信息结合，建立单细胞表面蛋白分型与突变整合分析的数据库；/n6)针对游离cDNA，通过基因测序分析cDNA，获取单细胞转录谱及亚型信息，利用转录组RNA上接上的细胞标签，获知每一条转录组RNA来源的细胞和微孔位置，从而将单细胞的基因突变、转录组和蛋白表达信息一一对应起来，形成高通量单细胞转录组与基因突变整合分析的完整数据库。/n
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