[发明专利]具有甲状腺素5'脱碘酶活力抗体酶的制备无效
| 申请号： | 99121250.9 | 申请日： | 1999-10-22 |
| 公开（公告）号： | CN1294192A | 公开（公告）日： | 2001-05-09 |
| 发明（设计）人： | 赵大庆;陈默;廉革伟;林凤;丁兰;刘仔;倪嘉缵 | 申请（专利权）人： | 中国科学院长春应用化学研究所 |
| 主分类号： | C12N9/00 | 分类号： | C12N9/00;C12P21/08;C07K16/00 |
| 代理公司： | 中国科学院长春专利事务所 | 代理人： | 曹桂珍 |
| 地址： | 130022 *** | 国省代码： | 吉林;22 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | 本发明属于具有甲状腺素5’脱碘酶活力抗体酶的制备方法。该方法以甲状腺素为半抗原,通过共价交联的方法,与牛血清白蛋白连接,制备成全抗原,采用单克隆抗体技术,制备具有甲状腺素结合能力的抗体,通过化学修饰,将甲状腺素脱碘酶的催化中心－SeH引入到抗体的抗原结合部位,赋予其甲状腺素脱碘酶的活性。制得的抗体酶稳定性好,活力达290U/mgPr。 | ||
| 搜索关键词： | 具有 甲状腺素 脱碘酶 活力 抗体酶 制备 | ||
【主权项】：
1．一种具有甲状腺素5’脱碘酶活力抗体酶的制备方法，其特征在于采用以下步骤完成：A．全抗原的制备将T4与牛血清白蛋白以30-50∶1(摩尔比)的比例溶解于pH8-11的Tris-HCl缓冲液中，其中，T4浓度为1-5mg／ml搅拌，逐渐滴加戊二醛，反应10-24小时，加入甘氨酸终止反应，除盐，冻干；B．单克隆抗体的制备a．免疫小鼠将抗原1-3mg／ml与福氏完全佐剂1∶1混合，摇匀，每只Bab／c小鼠注射100-300μl，两周后进行二次免疫，第四到十周每隔两周以福氏不完全佐剂免疫，用ELISA检测抗体；b．融合及抗体制备拉颈法处死小鼠，取脾脏，无菌条件下在预先放置培养液的平皿中去除脂肪组织，压碎，吸取细胞悬液，离心，弃上清，用完全培养液反复洗涤，得到0．5-1．5×108个脾细胞，加入0．1-0．5倍数量的骨髓瘤细胞，混合，离心，弃去上清的培养液，吸取1ml聚乙二醇(PEG)／二甲亚砜(DMSO)加入细胞中，混合1分钟；将含有PEG的细胞悬液反复洗涤，加入选择培养基，在培养板上37度、5％二氧化碳浓度下培养，一周后镜检，对明显的细胞集落孔进行ELISA，取阳性孔梯度稀释，扩大培养，进行初次克隆化，反复克隆化3-5次，获得单细胞克隆，将0．5-1．5×106的杂交瘤细胞注入Bab／C小鼠腹腔或采用体外培养法，在培养瓶中，得到腹水或培养上清；c．分离提纯抗体将腹水或体外细胞培养液离心，取上清采用亲和层析或离子交换柱提纯抗体，冻干；C．抗体酶的制备将提纯的抗体冻干粉5-10mg溶解在1ml除氧的pH6-8的磷酸缓冲液中，加入10-30μl 20mg／ml的苯甲基磺酰氟的乙腈溶液，室温振荡0．5-1小时，加入50-200μl预先除氧的1MNaHSe溶液，30-40度，在氮气保护下反应20-40小时，将反应液离心，除盐后冻干，制得抗体酶冻干粉。
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- 本发明整体上涉及生物技术工程，并且具体涉及一种能够产生具有类异戊二烯侧链的细胞分裂素(类异戊二烯细胞分裂素)的基因工程细菌及其制备和应用。
- T4 DNA连接酶的制备方法-202310182419.2
- 罗漫杰;施婧妮;陈俊颖;吕梦娴;徐灿;王梁 - 武汉瀚海新酶生物科技有限公司
- 2023-02-27 - 2023-09-05 - C12N9/00
- 本发明涉及T4DNA连接酶的制备方法。该T4DNA连接酶的制备方法，包括如下步骤：对含有T4DNA连接酶的粗酶液进行阴离子交换层析，得到第一洗脱液；对第一洗脱液进行疏水层析或者复合模式层析，得到第二洗脱液；对第二洗脱液进行亲和层析，得到T4DNA连接酶。将含有T4DNA连接酶的粗酶液进行三步层析，能够去除粗酶液中的各种杂质，使制备得到的T4DNA连接酶具有较高的活性。在与市售T4DNA连接酶在连接效率相当的前提下，上述T4DNA连接酶的制备方法得到的T4DNA连接酶稀释100倍至400倍后的连接效率高于市售T4DNA连接酶，具有较高的酶活性。
- 一种谷胱甘肽双功能合成酶突变体及其应用-202310766273.6
- 周伟;段子红;张欣玉;李小燕 - 华熙生物科技股份有限公司
- 2023-06-27 - 2023-09-01 - C12N9/00
- 本发明提供了一种谷胱甘肽双功能合成酶突变体，属于生物技术领域。所述谷胱甘肽双功能合成酶突变体选自如下任一种：其氨基酸序列由SEQ ID NO.1所示序列突变获得，所述突变为选自如下一个或多个氨基酸残基位点发生突变：14位、47位、49位、92位、107位、113位、136位、206位、230位、250位、251位、258位、269位、313位、345位、363位、373位、414位、416位、510位、531位。本申请通过对双功能谷胱甘肽合成酶StGshF的氨基酸序列(SEQ ID NO.1)进行定点突变，获得的单突变体，以及两个位点突变获得的双突变体，其酶活和热稳定性相较于野生型均具有显著提升。本申请提供的酶突变体，在生产谷胱甘肽以及构建生产谷胱甘肽的基因工程微生物中具有广阔的应用前景。
- 专利分类
