[发明专利]DNA保存溶剂及其保存方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种DNA(deoxyribonucleic acid，脱氧核糖核酸)的保存，特别是涉及一种DNA保存溶剂及其保存方法。

背景技术

DNA是染色体的重要组成充分，是真核生物的遗传基本物质，含有物种个体的遗传信息，可用于构建基因组文库、分离所需的基因和检测相关的分子标记等。由于DNA所含的遗传信息量大，并且容易获取，具有极其稳定的化学性质，是目前种质资源和遗传资源收集和保存的主要内容之一。

DNA分子的序列结构具有三个重要特性：(1)不同个体序列不一样；(2)终生不变；(3)同一人体各不同部位细胞中的DNA序列相同。因此DNA分子本身具备档案的特性，即具有长期稳定性、信息属性、个体特异性和可以备查的属性。

实际上，在疾病基因组学、药物基因组学、群体遗传学和进化等研究领域，DNA是最可靠的证据和研究过程的基本材料，被广泛应用。同时生命科学研究者日益认识到保存DNA对于今后系统生物医学的发展的重要性，各国纷纷开始保存DNA。世界上最早开始实施大规模DNA保存的是冰岛的Decode公司，全部DNA样本极其相关资料来自于将近1/3的冰岛成年人和90％以上的冰岛老年人。利用其建立的生物样本库，Decode找到了心肌梗塞等20多种疾病的致病基因。随后英国、美国、以色列等国家研究单位建立了类似的遗传资源样本库，并且以色列对外销售这些资料齐全的人DNA样本。

为了维持DNA结构的完整性，避免DNA大规模断裂和降解，DNA最佳保存方法是干粉-80℃或者液氮低温保存，但要制成干粉则需要大量的DNA，取材困难，在实际DNA样本资源收集中不具有操作性。而用无水乙醇保存DNA，虽然可以事先分装保存，但也存在反复冻融问题。而固相DNA保存技术是最近提出的新概念，适用于永久保存，并且这种方法的保存基质是否影响DNA后续实验、保存具体效果，目前无这方面的任何数据，尚有待时间考验。并且对于保存期间需要多次使用的样本，需要重新提取DNA，操作复杂，并且容易导致DNA断裂，将导致一些对DNA质量要求高的检测实验无法进行。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种DNA保存溶剂及其保存方法。利用该DNA保存溶剂，可以很简单地、长期保存DNA，并且DNA提取方便、避免DNA的反复冻融、成本低廉，为今后基因组学研究、身份鉴别、基因诊断、基因治疗、器官移植等提供最原始的DNA记录。

为解决上述技术问题，本发明的DNA保存溶剂，其组分包括：甘油、TE缓冲液(Tris-EDTA，EDTA：乙二胺四乙酸)、1-羧基-N，N，N-三甲基乙内酯，其中，甘油的终体积为25％～80％；TE缓冲液的终浓度为1×TE～5×TE，pH值为6～8，优选1×TE，pH值7.6；1-羧基-N，N，N-三甲基乙内酯的终浓度为1～6mol/L，优选3mol/L。

上述甘油和1-羧基-N，N，N-三甲基乙内酯作用主要是维持液态环境。

另外，本发明的DNA保存方法，包括步骤：

(1)提取DNA；

其中，该DNA可从生物的任何细胞、按照常规的提取方法进行提取及纯化；

(2)将DNA溶于如上所述的DNA保存溶剂中进行保存。

其中，DNA保存的最终浓度可以为1～10μg/L，如6μg/L左右，优选2～3μg/L。如DNA保存浓度很低，如直接大用量实验，保存溶剂中高浓度的甘油有可能影响后续的实验，而高保存浓度的DNA在实际应用中需要进一步稀释后才能实验，不影响后续实验。

所述保存温度可以为-20℃～-196℃。

与传统的DNA保存技术相比较，本发明具有如下优点：

(1)制作简单、成本低廉，只需要低温冰冻保存即可；

(2)由于含有高浓度的甘油，使得DNA一直处于液态环境中，避免机械切割力损害，从而能有效地防止DNA降解，因此，DNA保存效果好、保存期长。

(3)由于DNA保存于液态环境中，从冰箱或液氮中拿出来后，不需溶解，就可直接取样或分装，从而避免了反复冻融。

因此，本发明能长期保存DNA，如20年以上。

具体实施方式

以下实施例中的甘油、TE中的组分(Tris碱、HCl、EDTA)、1-羧基-N，N，N-三甲基乙内酯都是市售产品。

附图说明

附图是实施例3的基因组DNA电泳图，其中，孔1为DNA分子标记，孔2为实施例3中按照实施例1保存的DNA，孔3为实施例3中按照实施例2保存的DNA。

实施例1