[发明专利]用于HSV-1型和2型分型检测的组合物、试剂盒以及方法

说明书

本发明涉及分子生物学检测领域，更具体地，涉及HSV‑1和HSV‑2分型检测领域。本发明提供了一种组合物，其可特异性地检测HSV并对HSV‑1和HSV‑2进行分型。与此同时，本发明还提供了包括所述组合物的试剂盒以及用于对HSV‑1和HSV‑2进行分型的方法。本发明的组合物灵敏度高，同时具有简单的核酸提取方法以及具有完善的质控体系。

技术领域

本发明属于分子生物学检测领域，更具体地，属于HSV-1和HSV-2分型检测领域。

背景技术

疱疹病毒是一种有包膜的线型双链DNA病毒，目前发现了100多种，可以分为Alpha、Beta、Gamma三大类(亚科)。其中，单纯疱疹病毒是一类严重危害人类健康、引起皮肤病和性病的常见病原体。单纯疱疹病毒基因组为线性DNA分子，大小约152kb，由共价连接的长片段(ΜL)和短片段(US)组成，每一片段均含单一序列和反转重复序列。据估计，全球有37亿50岁以下的人(67％)罹患I型单纯疱疹病毒感染，有4.17亿人(11％)罹患II型单纯疱疹病毒感染。根据血清学、流行病学的研究，HSV可分为1型单纯疱疹病毒(HSV-1)和2型单纯疱疹病毒(HSV-2)，都属于疱疹病毒Alpha亚科。HSV-1与HSV-2病毒基因组具有相当大的同源序列，可高达50％。HSV-1主要引起眼、口、唇的皮肤和粘膜以及中枢神经系统的感染，产生疱疹性脑炎，疱疹性角膜炎等，少数引起生殖器疱疹；HSV-2感染外生殖器部位的皮肤粘膜，引起生殖器疱疹。生殖器疱疹具有长期潜伏性、彻底治愈难、病情反复发作等特点，给患者造成很大的身心负担。孕妇感染HSV的后果更为严重：妊娠早期感染HSV可引起流产、死产、死胎以及早产、畸形或智力低下；经产道及羊膜早破可引起感染新生儿，累及中枢神经系统，可引起新生儿疱疹等，甚至死亡，因此最有效的预防措施是开发灵敏、快速、准确的实验室诊断技术，提高无症状生殖器疱疹(Genital herpes，GH)妊娠妇女的筛查水平，在妊娠早期及晚期及时准确地诊断这类感染者，并采取积极防治措施，降低胎儿及新生儿的感染率，这对促进优生优育、提高人口出生质量具有重要的实际意义。

我国的单疱病毒检测试剂较多，包括血液学检测和病毒学检查，血液学检测主要包括酶联免疫法、胶体金法、化学发光法，定性检测人血清或血浆中的单纯疱疹病毒1型或2型IgG抗体亲和力。病毒学检测主要是病毒培养进行直接检测和HSV的DNA检测。在血液学检测中也存在较多的问题：由于HSV-1和HSV-2抗体在疱疹感染早期可能尚未形成或滴度过低，因此在早期感染者中常出现假阴性结果，需通过重复实验或选用不同厂家试剂来进行确诊。由于非型特异性的HSV抗体检测在疱疹诊断中缺乏临床意义，因此应使用型特异性糖蛋白gG1和gG2的HSV血清学检测试剂。虽然蛋白印迹是疱疹诊断的金标准，其敏感性＞97％、特异性＞98％，但由于操作复杂且无商品化产品，因此只在少数科研机构能够完成该检测。

直接检测病毒法是临床诊断和鉴定HSV感染最为可靠的方法，也是常规检测HSV的“金标准”方法。但是时间周期长，操作繁琐，需要专业的操作人员和严苛的试验条件，因此在快速临床诊断的方面应用很少。因此，检测HSV DNA是快速临床诊断应用最多的方法。目前国内外已有荧光PCR诊断试剂盒在临床HSV感染诊断中使用，但是缺乏简单的核酸提取方法和完善的质控体系，并且其灵敏度都不高，大多在10³拷贝/ml这一数量级，如中国专利公开CN101979667B，公开了一种HSV-1和HSV-2的荧光定量PCR分析方法，但其灵敏度仅为1000拷贝/ml。

因此为了满足临床准确诊断的需要，本领域需要更高灵敏度，同时具有简单的核酸提取方法和完善的质控体系的产品。

发明内容

有鉴于此，第一方面，本发明提供一种用于对HSV-1和HSV-2分析的引物和探针的组合物，所述组合物包括：

第一组：如SEQ ID NO:1所示的HSV-1型上游引物、如SEQ ID NO:2所示的HSV-1型下游引物和如SEQ ID NO:3所示的HSV-1型探针；和下述第二组和第三组中的任一组：