[发明专利]结合小鼠PD-L1和TGF-β的双特异性抗体及其制备方法与应用

说明书

本发明公开了一种结合小鼠PD‑L1和TGF‑β的双特异性抗体及其制备方法与应用，属于免疫学和抗体工程技术领域。该双特异性抗体包括两条对称分布且成形配对的长链和位于各长链外侧且分别与各长链配对的短链，各长链的氨基酸序列为SEQ ID NO:1且包含如下式I所示多肽链，各短链的氨基酸序列为SEQ ID NO:2且包含如下式II所示多肽链：VHa‑CH1‑X1‑VLb‑X2‑CH2‑CH3，式I；VLa‑CL‑X1‑VHb，式II。本发明公开的双特异性抗体以高亲和力与小鼠PD‑L1以及TGF‑β进行特异性结合，通过调节各抗原所参与的信号传导通路来发挥良好的生物学功能。

技术领域

本发明涉及一种新制备的双特异性抗体，属于免疫学和抗体工程技术领域，具体地涉及一种结合小鼠PD-L1和TGF-β的双特异性抗体及其制备方法与应用。

背景技术

单克隆抗体是仅作用于单一抗原表位的高度特异性抗体，已被广泛用于许多疾病的治疗，例如癌症、炎性疾症、自身免疫性疾病和感染性疾病。但是，这种治疗分子在单独使用时，该治疗分子不能显示出足够的药效。这可能是由于疾病的复杂性。例如，癌症或炎性疾病通常涉及多种疾病介导的分子通路以及信号通路之间的相叉作用。在这些情况下，靶向单一靶标的分子不能提供最佳的治疗效果。通过同时阻断多个靶标或者阻断同一靶标的多个位点处的分子能够改善治疗效果。由于多特异性分子、例如双特异性分子是单一分子，多特异性分子可以使得进行双靶向治疗可以简化新药的开发过程。与使用多个单特异性分子组合相比，使用多特异性分子对于患者和医疗服务提供者都更方便。

已经通过抗体过程开发了大量富于想象力的双特异性抗体样式并且研究了它们在疾病应用上的适应性。如2014年12月03日美国FDA审批安进公司研发的双特异性抗体Blincyto(Blinatumomab)上市，用于急性淋巴细胞白血病的治疗，又如默克公司研发的目前仍处于临床阶段的M7824，M7824是一种新型的双功能融合蛋白，该蛋白由靶向PD-L1蛋白的IgG1单克隆抗体和人类转化生长因子-β(TGF-β)受体II型融合而成。简单来说，这种双功能蛋白既能抑制PD-L1蛋白配体，又能抑制TGF-β通路，双管齐下，能促进免疫细胞对肿瘤细胞的杀伤。并且，同时靶向这两个系统或可克服肿瘤细胞对PD-1/PD-L1疗法的抗药性。这样就会极大地提升药物的有效率，并降低联合用药的副作用。

PD-1/PD-L1单抗因抗癌谱广、疗效持久、副作用易耐受而备受瞩目。在肿瘤微环境中，过度活化的PD-1/PD-L1通路抑制机体对肿瘤细胞的免疫监视和清除效应。传统认为肿瘤细胞高表达的PD-L1与T细胞表面的PD-1结合而抑制T细胞的免疫活性，PD-1/PD-L1单抗通过阻断这一负性免疫调控信号，解救T细胞，恢复抗肿瘤免疫。但是，从临床疗效看，PD-L1的不能很好的预测患者的疗效，甚至一些肿瘤不表达PD-L1的患者也能获益。

近期研究发现在肿瘤-免疫循环模型中，除了公认的PD-1/PD-L1通路，肿瘤微环境中高表达的TGF-β也可以广泛的调控多种免疫相关的效应细胞活性，重塑肿瘤免疫微环境，共同参与肿瘤细胞免疫逃逸。TGF-β可能成为制约抗肿瘤免疫应答的限速步骤，从而影响PD-1/PD-L1抗体的疗效。