[发明专利]基于HBV S区的高敏HBV RNA定量检测的引物探针组合物、试剂盒及其应用有效
| 申请号： | 202110198820.6 | 申请日： | 2021-02-22 |
| 公开（公告）号： | CN112725538B | 公开（公告）日： | 2021-12-14 |
| 发明（设计）人： | 孙剑;周彬;侯金林;刘诗 | 申请（专利权）人： | 南方医科大学南方医院 |
| 主分类号： | C12Q1/70 | 分类号： | C12Q1/70;C12Q1/6851;C12N15/11;C12R1/93 |
| 代理公司： | 北京品源专利代理有限公司 11332 | 代理人： | 巩克栋 |
| 地址： | 510000 广东省*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 基于 hbv rna 定量 检测 引物 探针 组合 试剂盒 及其 应用 | ||
【说明书】：
本发明提供了基于HBV S区的高敏HBV RNA定量检测的引物探针组合物、试剂盒及其应用，所述引物探针组合物的靶基因位于乙肝病毒基因组的S区。本发明以乙肝病毒基因组的S区基因为靶点，设计特异性引物探针，基于所述引物探针构建的荧光定量PCR HBV RNA检测方法对于检测低病毒载量患者的血清HBV RNA具有灵敏准确的效果，基于该方法学实现了准确预测慢乙肝患者停药复发、肝癌发生和HBsAg转阴的效果，还可以评估和预测药物治疗效果、临床应用前景广阔。
技术领域
本发明属于生物医药技术领域，涉及基于HBV S区的高敏HBV RNA定量检测的引物探针组合物、试剂盒及其应用。
背景技术
乙型肝炎病毒(HBV)DNA水平是肝细胞癌(HCC)发生发展的独立危险因素，HBV DNA水平越高，患者发生HCC的风险就越高。因此，针对HBV DNA水平高引起的肝脏损伤慢性乙型肝炎(CHB)患者，国内外《慢性乙型肝炎防治指南》均建议他们接受核苷(酸)类药物(NAs)或者聚乙二醇干扰素(Peg-IFN)治疗，以控制病毒复制，延缓疾病进展，降低HCC的发生风险。由于目前难以实现慢性HBV感染的治愈(HBsAg转阴、肝内cccDNA清除)，因此，科学家们将HBV DNA转阴(病毒学应答)、HBeAg血清学转换(HBeAg血清学应答)作为抗病毒治疗的应答指标，以评估抗病毒治疗药物的疗效。已有研究表明，在抗病毒治疗过程中，实现病毒学应答和HBeAg血清学应答的患者较非应答患者/应答不佳患者，HCC发生风险显著下降，提示HBV DNA和HBeAg是监测慢乙肝患者抗病毒治疗疗效和慢性肝病进展的重要临床指标。
近年，随着核苷类抗病毒药物在慢乙肝患者中的普遍应用，很多患者获得了很好的病毒抑制效果，大多数患者达到血清HBV DNA检测不到、HBeAg血清学转换的治疗效果，而HBsAg水平变化不大。这种情况下，需要新的能够反应病情变化的指标。其中HBV RNA作为cccDNA的直接下游产物，比HBV DNA更能代表肝内cccDNA的状态。已有研究表明血清HBVRNA与肝内cccDNA转录活性相关，是慢乙肝患者抗病毒治疗应答的早期预测指标，并且可以预测NAs停药后疾病复发的情况。
实际上，血清HBV RNA的存在形式较HBV DNA复杂。科学家们发现，血清HBV RNA主要为HBV前基因组RNA(pgRNA)(Wang J,Shen T,Huang X,et al.Serum hepatitis B virusRNA is encapsidated pregenome RNA that may be associated with persistence ofviral infection and rebound.J Hepatol.2016；65(4):700-710.)，pgRNA长短不一，既存在完整的全长pgRNA，又存在3’端截断型pgRNA以及不同剪接形式的pgRNA(Liu S,Zhou B,Valdes JD,Sun J,Guo H.Serum Hepatitis B Virus RNA:A New Potential Biomarkerfor Chronic Hepatitis B Virus Infection.Hepatology.2019；69(4):1816-1827.)。而以往的关于HBV RNA的临床研究中，不同研究团队采用的HBV RNA检测方法各不相同，因此，检测到的HBV RNA种类可能是不同的，这可能会导致不同的研究结果，如由某一检测方法测定的HBV RNA水平可以预测慢乙肝患者抗病毒治疗应答的HBV RNA，但是不一定可以预测停药后疾病复发。HBV RNA阳性，代表患者肝内cccDNA仍在活跃转录，患者停药后复发风险极高并可能增加疾病进展风险。因此，建立血清HBV RNA检测方法，尤为需要关注检测灵敏度以及对于低病毒载量样本的阳性率，以避免出现假阴性，增加患者慢性肝病进展风险。
发明内容
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- 本发明涉及一种高危型人乳头瘤病毒分型检测的引物探针组及其应用、试剂盒及检测方法。本发明提供的试剂盒中包含特异性引物探针组，并对反应体系进行合理优化，保证了对高危型人乳头瘤病毒分型检测的灵敏度和特异性，使其更加贴合对受试者尿液样本的检测。试剂盒中包含的标准品可以辅助完成对人乳头瘤病毒高危型别进行分型定量检测，搭配不受采样手法的不同而影响质量的尿液样本，能保证细胞量维持在一个相对均衡的水平，使定量检测的结果更有意义。同时，本发明提供的检测方法能够对受检者体内HPV病毒进行定量检测，从而观察受检者体内在一定时间段内病毒型别与载量的变化情况，从而给予临床医生更多帮助，有利于医生出具针对性的治疗方案。
- 一种RT-qPCR检测黄瓜花叶病毒的方法-202311143956.2
- 刘艳梅 - 南昌师范学院
- 2023-09-06 - 2023-10-24 - C12Q1/70
- 本发明公开了一种RT‑qPCR检测黄瓜花叶病毒的方法，涉及生物技术领域。该方法包括以下步骤：(1)提取得到待检样品的总RNA，之后反转录得到cDNA；(2)以所述cDNA为模板，利用特异性引物对进行RT‑qPCR反应，根据Ct值判断所述待检样品中是否含有黄瓜花叶病毒：当15Ct值35时，为阳性，即为含有所述黄瓜花叶病毒；当Ct值≥35时，为阴性，即为不含有所述黄瓜花叶病毒。本发明针对黄瓜花叶病毒基因组编码外壳蛋白的基因保守区域，设计了特异性强的RT‑qPCR检测引物，并建立了一种高效的RT‑qPCR检测方法，可为黄瓜花叶病毒的准确高效监测防控提供了技术支持。
- 适用于15种植物检疫病毒的靶向测序建库及检测方法-202210150996.9
- 毛凌峰;孙凯;尹传林;俞晓平 - 杭州柏熠科技有限公司
- 2022-02-18 - 2023-10-24 - C12Q1/70
- 本发明提供一种适用于15种植物检疫病毒的靶向测序建库及检测方法，设计针对15种植物检疫病毒的特异引物池，并将特异性多重反转录技术与纳米孔技术相结合，建立针对15种植物检疫病毒的靶向捕获测序方法，具备高灵敏度、高通量、低成本的优点，可实现单次建库测序检测15种植物检疫病毒的目标，可解决目前植物病毒检疫存在的检测通量低、检测目标单一的问题。
- 检测BK病毒的方法和组合物-201910529553.9
- F·陈;L·I·孔;J·陈;M·捷纳提保 - 焦点诊断公司
- 2006-07-25 - 2023-10-24 - C12Q1/70
- 本发明提供了用于快速、灵敏和高度特异性地基于核酸(例如，基于DNA)检测样品中的BK病毒的方法和组合物。一般地，所述方法涉及检测具有BK病毒基因组保守区域的靶序列的靶核酸。本发明也表征了用于本发明方法的组合物和试剂盒，所述组合物包括引物、探针。
- 猫杯状病毒灭活抗原的毒价检测方法及应用-202310790990.2
- 朱旭;郝鹏;张燕红;王艳杰;张海宝;韩冬;李晓燕;孟书丽;赵嘉楠;赵飞飞;高晓宇;吴孟楠;李培艳;燕成义;杨晶;乌恩宝音;海丽丽;段可欣 - 金宇保灵生物药品有限公司;金宇共立动物保健有限公司
- 2023-06-29 - 2023-10-20 - C12Q1/70
- 本发明涉及微生物检测技术领域，尤其涉及一种猫杯状病毒灭活抗原的毒价检测方法及应用。所述猫杯状病毒灭活抗原的毒价检测方法包括如下步骤：使用灭活剂处理猫杯状病毒液，得到灭活抗原液；使用透析袋去除所述灭活抗原液中的灭活剂，得到纯化灭活抗原；所述透析袋的规格为80‑200kd；所述透析袋的透析时间为5‑12h；测定所述纯化灭活抗原的毒价。所述方法通过透析袋透析灭活剂处理后的灭活抗原，能精准的控制灭活剂的处理时间，进而缩短灭活周期。且使用透析袋可以去除灭活剂残留，在进行灭活检验时，不会因为灭活剂残留而影响灭活结果的判定。本发明所述方法无需多次抗原传代，即可获得抗原的灭活检验结果。
- 引物组和探针、试剂盒、检测猪流行性腹泻病毒野毒株和疫苗株的方法-202311144718.3
- 刘志成;勾红潮;沈海燕;张春红;乌日尼乐;聂晶晶;瞿云芝;张建峰 - 广东省农业科学院动物卫生研究所
- 2023-09-06 - 2023-10-20 - C12Q1/70
- 本发明属于生物技术领域，公开了一种引物组和探针，包含核苷酸序列分别如SEQ ID NO：1‑6所示的FIP、BIP、F3、B3、LoopF和LoopB组成的引物组以及如SEQ ID NO：7‑8所示的荧光探针probe和淬灭探针Quencher，该引物组能够对猪流行性腹泻病毒野毒株、疫苗株均进行扩增，对于野毒株的ORF3基因保守区域开发出荧光引物，用于进行荧光的特征性反应，实现了对猪流行性腹泻病毒野毒株和疫苗株的高特异性、敏感性的快速定量检测。同时，本发明还提供了一种试剂盒、检测猪流行性腹泻病毒野毒株和疫苗株的方法。
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