[发明专利]一种4-氨基二苯甲酮人工抗原的制备方法无效
申请号: | 201010182488.6 | 申请日: | 2010-05-21 |
公开(公告)号: | CN101830981A | 公开(公告)日: | 2010-09-15 |
发明(设计)人: | 胥传来;许宙;林菲;宋姗姗;陈连君 | 申请(专利权)人: | 江南大学 |
主分类号: | C07K14/765 | 分类号: | C07K14/765;G01N21/31 |
代理公司: | 无锡市大为专利商标事务所 32104 | 代理人: | 时旭丹;刘品超 |
地址: | 214122 江苏省无锡*** | 国省代码: | 江苏;32 |
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摘要: | 一种4-氨基二苯甲酮人工抗原的制备方法,属于生物化工技术领域。由于二苯甲酮没有偶联必须的基团,所以采用4-氨基二苯甲酮作为半抗原,两者具有相同的母体,本发明利用二苯甲酮的类似物4-氨基二苯甲酮,制备4-氨基二苯甲酮人工抗原。本发明以4-氨基二苯甲酮为半抗原,用重氮化法将其与载体蛋白BSA偶联,用分光光度法测定偶联物的偶联比。本发明成功合成了4-氨基二苯甲酮的人工抗原,合成步骤简洁,有效,完全可用于免疫分析中,为以后人们的研究提供了必需的人工抗原,可以满足国内对二苯甲酮和4-氨基二苯甲酮研究的需要。 | ||
搜索关键词: | 一种 氨基 二苯甲酮 人工 抗原 制备 方法 | ||
【主权项】:
一种4-氨基二苯甲酮人工抗原的制备方法,其特征在于以4-氨基二苯甲酮为半抗原,用重氮化法将其与载体蛋白BSA偶联,用分光广度法测定偶联物的偶联比;(1)人工抗原的合成:A液:取0.1mmol 4-氨基二苯甲酮溶于6mL N,N-二甲基甲酰胺,冰浴,加入1mL 2mol/L HCl,再加13mL水,冰浴,滴加质量浓度1%NaNO2溶液,冰浴中持续搅拌,NaNO2溶液的加入量用淀粉-碘化物试纸进行监控,试纸变成蓝黑色以后,4℃下搅拌孵育15分钟为A液;B液:牛血清白蛋白BSA 0.002mmol溶于0.05mol/L、pH 9.6的碳酸盐CBS缓冲液中,为B液,4℃保存待用;将A液逐滴加入B液中,调pH 9.0然后置4℃下孵育半小时,室温反应4小时,即得4-氨基二苯甲酮人工抗原混合液;透析袋前处理:取10cm的透析袋,于沸水中煮沸5min,再用60℃的去离子水冲洗3min,保存在4℃去离子水中备用;将4-氨基二苯甲酮人工抗原混合液移入透析袋中,用2×2L的0.01M的pH7.4的磷酸盐缓冲溶液和2×2L的去离子水透析3天,最后使用冻干法将透析袋中的液体制成粉末,即得到4-氨基二苯甲酮人工抗原;(2)人工抗原的鉴定:4-氨基二苯甲酮人工抗原采用分光光度法鉴定其偶联结果,利用标准蛋白得到标准曲线,计算其偶联比。
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