[发明专利]一种高纯度D-荧光素的制备和纯化方法

摘要

本发明公开了一种高纯度D-荧光素的制备和纯化方法。本发明的制备方法是在充氮气的条件下，2-氰基-6-羟基苯并噻唑与D-半胱氨酸在碱性条件下进行缩合反应，反应完毕后在充氮气的条件下用有一定极性的非水溶性有机溶剂进行萃取，萃取后的水相用盐酸进行酸化，分离沉淀物，沉淀物用溶水性有机溶剂进行洗涤，离心去上清，沉淀物真空干燥，即获得高纯度D-荧光素产品。利用本发明的高纯度D-荧光素的制备方法，可以获得高纯度的D-荧光素产品，并且其D-荧光素的发光比活力较高，得率也高，如果用原料脱甲基产物2-氰基-6-羟基苯并噻唑的纯度(M176≥85％)时，其制备的高纯度的D-荧光素产品的纯度可达90％(HPLC，％Wt)以上，发光比活力达到甚至高于Sigma L9504D-荧光素。

主权项

一种高纯度D‑荧光素的制备方法，它是由2‑氰基‑6‑甲氧基苯并噻唑和盐酸吡啶进行高温脱甲基反应，然后提取脱甲基反应产物，经柱层析纯化，最后将纯化的脱甲基产物2‑氰基‑6‑羟基苯并噻唑与D‑半胱氨酸进行缩合反应生成D‑荧光素，纯化即得D‑荧光素产品，其特征在于，所述的将纯化的脱甲基产物2‑氰基‑6‑羟基苯并噻唑与D‑半胱氨酸进行缩合反应生成D‑荧光素，纯化即得D‑荧光素产品是在充氮气的条件下，2‑氰基‑6‑羟基苯并噻唑与D‑半胱氨酸在碱性条件下进行缩合反应，反应完毕后在充氮气的条件下用有一定极性的非水溶性有机溶剂进行萃取，萃取后的水相用盐酸进行酸化，分离沉淀物，沉淀物用溶水性有机溶剂进行洗涤，离心去上清，沉淀物真空干燥，即获得高纯度D‑荧光素产品。