[发明专利]除虫菊组织培养方法

摘要

除虫菊组织培养方法，利用除虫菊尚未张开的花蕾作为组织培养的外植体材料，花蕾经过灭菌消毒以后取其花托接种到愈伤组织诱导培养基上，花托经过培养以后得到绿色的愈伤组织，将得到的愈伤组织转接到愈伤组织分化培养基中培养以后得到除虫菊从生苗，得到的除虫菊从生苗经过无菌苗增殖以后得到大批量的除虫菊从生苗，将除虫菊从生苗转接到生根培养基中，培养得到除虫菊生根苗，得到的除虫菊生根苗经过炼苗后移栽到大田中栽培除虫菊的花朵。采用该方法得到的种苗能够保持除虫菊母本的优良性状，繁殖速度快、成活率高，水培炼苗操作简便，管理简单易行，成本低，炼苗和移栽成活率高。

主权项

除虫菊组织培养方法，其特征在于包括以下步骤：（a）外植体取材及灭菌：选取除虫菊优良品种的外植体材料，所选取的外植体材料要求健壮、无病、无虫害；将所选取的外植体材料放到自来水下流水冲洗5‑10分钟，然后将冲洗好的外植体材料放置在质量百分比浓度为15%的次氯酸钠溶液中浸泡，在浸泡过程中不断地搅拌和振荡，浸泡时间为10‑20分钟，浸泡完成以后，将外植体材料从次氯酸钠溶液中取出来，然后用无菌水冲洗外植体材料，冲洗次数为3‑5遍，冲洗好的外植体材料接种备用；（b）愈伤组织诱导：将冲洗好的外植体材料放到超净工作台中，用镊子剥开外植体材料后露出外植体，然后用接种刀切下外植体，将切下来的外植体接种到装有愈伤组织诱导培养基的Ⅰ号培养瓶中，然后将接种有外植体的Ⅰ号培养瓶摆放到培养室内培养，调节控制培养室的温光条件为：温度20±5℃，光照强度1000‑1200Lex，光照时间12hr/d，在此条件下培养30‑40天，接种到Ⅰ号培养瓶中的外植体膨大成为绿色的愈伤组织；（c）愈伤组织分化：在Ⅱ号培养瓶中装入愈伤组织分化培养基，将Ⅰ号培养瓶中得到的绿色的愈伤组织分切成为直径0.5cm的愈伤组织块，然后将愈伤组织块转接到Ⅱ号培养瓶中的愈伤组织分化培养基上，把接种有愈伤组织块的Ⅱ号培养瓶摆放到培养室内, 调节控制培养室的温光条件为：温度20±5℃，光照强度1000‑1200Lex，光照时间12hr/d，在此条件下培养20‑30天，接种到Ⅱ号培养瓶中的愈伤组织块分化后获得除虫菊从生苗；（d）无菌苗增殖：在Ⅲ号培养瓶中装入无菌苗增殖培养基，把Ⅱ号培养瓶中分化获得的除虫菊从生苗转接到Ⅲ号培养瓶中的无菌苗增殖培养基上，把接种有除虫菊从生苗的Ⅲ号培养瓶摆放到培养室中，调节控制培养室的温光条件为：温度20±5℃，光照强度1000‑1200Lex，光照时间12hr/d，在此条件下培养30天后，接种到Ⅲ号培养瓶中的除虫菊从生苗分化扩繁得到更多的除虫菊从生苗，在Ⅲ号培养瓶中除虫菊从生苗每次分化扩繁的速度为4‑5倍；重复上述无菌苗增殖过程以后，能扩繁得到大批量的除虫菊从生苗；（e）生根：在Ⅳ号培养瓶中装入除虫菊生根培养基，将Ⅲ号培养瓶中扩繁得到的除虫菊从生苗用接种刀切成单株苗，然后将切成的单株苗转接到Ⅳ号培养瓶中的除虫菊生根培养基上，把接种有除虫菊单株苗的Ⅳ号培养瓶放置到培养室中，调节控制培养室的温光条件为：温度20±5℃，光照强度1000‑1200Lex，光照时间12hr/d，在此条件下培养15‑20天后，在Ⅳ号培养瓶中得到除虫菊生根苗，每株苗的生根数量为20‑25条，每条根的长度为1.5‑2.0cm；（f）炼苗：将除虫菊生根苗从Ⅳ号培养瓶中取出来，洗去除虫菊生根苗根部的培养基，将洗掉培养基的除虫菊生根苗进行炼苗，炼苗结束以后，将炼苗得到的除虫菊组培苗移栽到大田中，经过种植栽培管理以后收获除虫菊的花朵。