[发明专利]用于纯化重组恶性疟原虫环子孢子蛋白的方法有效
| 申请号： | 201380033337.6 | 申请日： | 2013-04-22 |
| 公开（公告）号： | CN104379596B | 公开（公告）日： | 2018-05-29 |
| 发明（设计）人： | J·艾伦;G·坎廷;R·哈弗斯托克 | 申请（专利权）人： | 菲尼克斯公司 |
| 主分类号： | C07K14/445 | 分类号： | C07K14/445 |
| 代理公司： | 北京市金杜律师事务所 11256 | 代理人： | 陈文平;徐志明 |
| 地址： | 美国加利*** | 国省代码： | 美国;US |
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| 摘要： | 本发明涉及用于以高产率纯化高品质的重组恶性疟原虫(Plasmodium falciparum)环子孢子蛋白的方法。这一方法以高产率提供rCSP而不需要变性和重折叠该蛋白质。本发明克服了本发明领域中先前遇到的障碍，包括rCSP的二聚化、聚集和N‑末端降解。本发明提供的方法是可放大的，且可以应用于大的发酵批次。本发明还涉及重组恶性疟原虫环子孢子蛋白的稳定液体制剂及用于稳定地维持rCSP在稳定液体制剂中的方法。 | ||
| 搜索关键词： | 环子孢子蛋白 恶性疟原虫 稳定液体制剂 高产率 末端降解 二聚化 高品质 重折叠 变性 蛋白质 发酵 放大 应用 | ||
【主权项】：
1.一种用于纯化重组恶性疟原虫环子孢子蛋白的方法，所述方法包括：(a)获得含有重组恶性疟原虫环子孢子蛋白二聚体的细菌细胞裂解物制剂；(b)将步骤(a)的细菌细胞裂解物制剂分离成含有所述重组恶性疟原虫环子孢子蛋白二聚体的可溶性部分，和不溶性部分；(c)将步骤(b)的可溶性部分中的所述重组恶性疟原虫环子孢子蛋白二聚体与可溶性部分中的宿主细胞蛋白质分离；和(d)使在步骤(c)中得到的所述重组恶性疟原虫环子孢子蛋白二聚体经历优先还原条件，其中所述优先还原条件还原分子间二硫键以分离单体而同时保持各单体的分子内二硫键，其中所述优先还原条件包含轻度还原剂，且所述轻度还原剂是浓度0.01至0.03mM的DTT；从而获得纯化的重组恶性疟原虫环子孢子蛋白而不需要蛋白质的变性和重折叠，其中所得到的纯化重组恶性疟原虫环子孢子蛋白包括最N-末端的半胱氨酸，该最N-末端的半胱氨酸对应于SEQ ID NO：1的Cys25，且其中不超过10％的所得到的纯化重组恶性疟原虫环子孢子蛋白是二聚化的，和不超过10％的所得到的纯化重组恶性疟原虫环子孢子蛋白以高分子量聚集体存在。
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