[发明专利]一种H7N9假病毒的制备方法及该H7N9假病毒的应用

摘要

一种H7N9假病毒的制备方法及该H7N9假病毒的应用，属于生物医药技术领域。它是将H7N9禽流感病毒的HA，NA基因序列克隆至哺乳动物表达载体pVAX‑1，然后用pVAX‑HA，逆转录病毒载体pNL‑4.3.luc.E‑R‑等质粒共转染293T细胞产生H7N9假病毒颗粒。利用H7N9假病毒及假病毒细胞模型筛选抑制H7N9禽流感病毒进入细胞抑制剂和神经氨酸酶抑制剂，利用H7N9假病毒进行流感病毒中和抗体的研究，利用H7N9假病毒作为抗流感免疫制剂预防和治疗流感病毒感染。

主权项

1.一种H7N9假病毒的制备方法，其特征在于包括以下步骤：1）在6孔板中接种4×105个293T细胞，培养至80%铺满；2）将质粒pNL‑4.3.luc.E‑R‑和pVAX‑HA按照3：1混合，加入脂质体转染试剂，得到DNA‑脂质体复合物；3）将DNA‑脂质体复合物逐滴滴加到293T细胞培养液中，37℃培养；4）5h后弃培养液，用PBS冲洗细胞一次，更换新鲜的含0.5 μg/ml细菌来源的神经氨酸酶的Opti‑DMEM培养液；5）继续培养48 h，收获上清液，1000×g离心10 min去除细胞碎片，0.45 μm滤器过滤后保存于‑80℃。