[发明专利]一种鸡功能性巨噬细胞的分离和培养方法及其诱导培养基

摘要

本发明公开了一种鸡功能性巨噬细胞的分离和培养方法及其诱导培养基，所述方法的步骤包括：(1)制备含巨噬细胞刺激因子的培养基；(2)直接从12-21日龄幼龄鸡腿骨或胫骨获得鸡骨髓来源巨噬细胞前体细胞，或者用鸡淋巴细胞分离液分离鸡血液细胞，获得鸡血液来源淋巴细胞前体细胞；(3)用含巨噬细胞刺激因子的培养基诱导分化获得鸡巨噬细胞；所述诱导培养基为含有巨噬细胞刺激因子的RPMI-1640完全培养基。本发明首次建立了鸡功能性巨噬细胞分离和培养工艺，获得成熟的具有吞噬功能的巨噬细胞，为进一步研究鸡巨噬细胞的在免疫、代谢和调节方面奠定了基础。

主权项

一种鸡功能性巨噬细胞的分离和培养方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)含巨噬细胞刺激因子的培养基的制备：用RPMI‑1640完全培养基培养鸡巨噬细胞系HD‑11，5‑7d后待细胞上清为黄色时收集细胞上清，获得HD‑11细胞上清，将HD‑11细胞上清经0.22um滤器过滤后加入RPMI‑1640完全培养基中，获得含巨噬细胞刺激因子的培养基；所述RPMI‑1640完全培养基中含有10％体积比的胎牛血清FBS和终浓度为100U/mL的青霉素和链霉素双抗；(2)巨噬细胞的分离：取12‑22日龄的鸡心脏血液细胞，用鸡淋巴细胞分离液分离获得鸡血液来源淋巴细胞前体细胞；或者直接从12‑22日龄的鸡胫骨和腿骨中无菌分离获得鸡骨髓来源巨噬细胞前体细胞。(3)巨噬细胞的体外培养：将步骤(2)的鸡血液来源淋巴细胞前体细胞或鸡骨髓来源巨噬细胞前体细胞接种至步骤(1)的含巨噬细胞刺激因子的培养基中进行培养，待细胞开始贴壁生长后，用所述含巨噬细胞刺激因子的培养基换液一次，以后每隔24‑48h换液一次，获得的分化细胞即为鸡功能性巨噬细胞；待细胞长至50％细胞板时，用不含巨噬细胞刺激因子的RPMI‑1640完全培养基继续培养。