[发明专利]一种检测斑马鱼体内胰脂肪酶活性的方法与应用

摘要

本发明公开了一种检测斑马鱼体内胰脂肪酶活性的方法，主要包括如下步骤：(1)斑马鱼选取；(2)斑马鱼的最佳发育阶段的确定；(3)斑马鱼的最佳数量的确定；(4)待测药物在斑马鱼体内的胰脂肪酶活性检测。本发明还涉及了一种运用该方法在筛选、评价胰脂肪酶抑制剂中的应用，主要包括如下步骤：(1)斑马鱼选取；(2)供试品处理；(3)测定吸光值并计算胰脂肪酶活性抑制率。本发明提供的检测方法，具有简单、高效、快速等优点，可应用于筛选胰脂肪酶抑制剂，实现体内高通量筛选胰脂肪酶抑制剂，对肥胖症或体重超重患者的治疗有着重要意义。

主权项

1.一种检测斑马鱼体内胰脂肪酶活性的方法，包括如下步骤：(1)斑马鱼选取取4～5对斑马鱼亲本交配、孵化，挑取发育正常的斑马鱼移入6、12、24、48、96或384孔微孔板中，根据微孔板规格放入不同数量的斑马鱼；(2)斑马鱼的最佳发育阶段的确定用40μg/mL的胰脂肪酶荧光检测试剂p‑NPP处理不同发育阶段的斑马鱼，并加入100μl反应液，作为实验组；底物对照组为不含斑马鱼的反应液，作为对照组；各组在养殖用水中反应24小时，反应结束后，微孔板分析并测定吸光值，并通过统计学处理数据，比较不同发育阶段的斑马鱼体内胰脂肪酶的活性强弱，判断并确定最佳的斑马鱼发育阶段；所述不同发育阶段的斑马鱼为受精后3天(3dpf)、受精后4天(4dpf)或受精后5天(5dpf)的斑马鱼；所述最佳发育阶段的斑马鱼为受精后5天(5dpf)的斑马鱼；(3)斑马鱼的最佳数量的确定用40μg/mL的胰脂肪酶荧光检测试剂p‑NPP处理不同数量的斑马鱼，并加入100μl反应液，作为实验组；底物对照组为不含斑马鱼的反应液，作为对照组；各组在养殖用水中反应24小时，反应结束后，微孔板分析并测定吸光值，并通过统计学处理数据，比较不同数量的斑马鱼体内胰脂肪酶的活性强弱，判断并确定最佳的斑马鱼数量；所述不同数量的斑马鱼为2尾/孔、4尾/孔；所述最佳数量的斑马鱼为2尾/孔；(4)待测药物在斑马鱼体内的胰脂肪酶活性检测用40μg/mL的胰脂肪酶荧光检测试剂p‑NPP处理含有不同浓度的待测药物的5dpf斑马鱼，斑马鱼数量为2尾/孔，并加入100μl反应液，作为实验组；底物对照组为不含斑马鱼的反应液，作为空白对照组；用p‑NPP处理不含待测药物的5dpf斑马鱼，作为正常对照组；各组在养殖用水中反应24小时，反应结束后，微孔板分析并测定吸光值，并通过统计学处理数据，比较不同浓度的待测药物在斑马鱼体内胰脂肪酶的活性强弱，判断并确定待测药物的最佳浓度。