[发明专利]一种流感病毒疫苗的生产方法

摘要

本发明公开了一种查尔酮在vero细胞生产流感病毒中的应用，本发明人意外发现该物质在Vero细胞的无血清培养基中应用，可以减少昂贵生长激素的添加，并且容易达到高密度，同时病毒效价高，病毒包膜完整，产品品质优异而生产成本低廉。本发明的工艺流感病毒的最高效价达到1：1280。

主权项

1.一种用vero细胞生产流感病毒的方法，其步骤如下:（1）制备下述培养基，其特征在于其包括如下组分，以下含量以毫克/升计为：新橙皮苷二氢查尔酮 1.0L‑色氨酸           10L‑半胱氨酸         100L‑异亮氨酸         225L‑亮氨酸           90L‑缬氨酸           100L‑精氨酸盐酸盐     750L‑赖氨酸           340L‑蛋氨酸           60L‑谷氨酸           70L‑苯丙氨酸         216L‑天冬酰胺         900甘氨酸             15L‑脯氨酸           180L‑丙氨酸           55L‑天冬氨酸         67L‑丝氨酸           290L‑苏氨酸           145L‑谷氨酰胺         670维生素C            83烟酰胺             8核黄素             0.6盐酸硫胺素         3.5氯化胆碱           9D‑泛酸钙           0.3叶酸               3.8六水氯化镁         50无水硫酸镁         55无水氯化钙         100氯化钾             450氯化钠             5000一水磷酸二氢钠     200磷酸氢二钠         150甘氨酸铁           0.01五水硫酸铜         0.001；酵母浸膏           8000；亚油酸             0.02亚麻酸             0.09；碳酸氢钠           3000D‑葡萄糖           4000次黄嘌呤钠盐       6硫辛酸             0.3；（2）使用上述培养基，将Vero细胞以0.3×10⁶细胞数/毫升密度接种于5升搅拌式生物反应器中，cytodex‑1微载体浓度为4克/升，在细胞密度达到5.8*10⁶细胞数/毫升直接按照M.O.I为0.01接种流感病毒，维持78小时即收获；反应器参数设置：温度为37℃、pH值为7.2、溶氧为40％饱和空气、搅拌速度为65转/分钟，依据残糖浓度更换新鲜培养液，用结晶紫法计数活细胞密度；所述流感病毒为流感病毒A1，其为A / NEW / CALEDONIA / 20 /99，其来自NIBSC。