[发明专利]重组微生物源天然虾青素基因工程菌及其产物的制备方法在审
| 申请号： | 201810658540.7 | 申请日： | 2018-06-25 |
| 公开（公告）号： | CN108998465A | 公开（公告）日： | 2018-12-14 |
| 发明（设计）人： | 胡向东;叶茂;胡伟卿 | 申请（专利权）人： | 浙江皇冠科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/81 | 分类号： | C12N15/81;C12P23/00;C12R1/865 |
| 代理公司： | 北京国翰知识产权代理事务所(普通合伙) 11696 | 代理人： | 卫翠婷 |
| 地址： | 310012 浙江省杭*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | 本发明公开了重组微生物源天然虾青素基因工程菌及其产物的制备方法，该工程菌的制备方法包括基因扩增、制备克隆质粒、制备重组表达质粒、制备重组微生物源天然虾青素基因工程菌。工程菌产物的制备方法为：将活化后工程菌进行一级种、二级种摇瓶培养、酵罐培养，培养结束后收集菌体，避光下加入STET缓冲液和溶菌酶，搅拌均匀后置于水浴中，细胞裂解液裂解，离心上清加入异丙醇沉降，用无菌水溶解离心沉淀，冷冻干燥，即得重组虾青素。有益效果为：本发明该工程菌生长繁殖迅速、能成功表达出重组虾青素蛋白，表达量高、产量高，得到的重组虾青素为3S,3'S构型，工程菌发酵制备重组虾青素的产量高、效率高，大大节省人力物力成本。 | ||
| 搜索关键词： | 制备 工程菌 虾青素 基因工程菌 天然虾青素 重组微生物 重组表达质粒 细胞裂解液 基因扩增 克隆质粒 离心沉淀 人力物力 收集菌体 摇瓶培养 沉降 表达量 二级种 缓冲液 溶菌酶 无菌水 异丙醇 避光 活化 酵罐 裂解 水浴 发酵 溶解 蛋白 繁殖 生长 成功 | ||
【主权项】：
1.重组微生物源天然虾青素基因工程菌的制备方法，包括基因扩增、制备克隆质粒、制备重组表达质粒、制备重组微生物源天然虾青素基因工程菌，其特征在于：所述基因扩增步骤为：提取P.agglomerans的基因组DNA，PCR扩增crtE、crtB、crtI、crtY基因编码框，同时提取红法夫酵母的总RNA，逆转录成cDNA模版，PCR扩增crtS、crtR基因编码区。
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- 2016-05-25 - 2019-07-09 - C12N15/81
- 本发明涉及基因工程技术领域，尤其是涉及一种可提高酿酒酵母乙醇产率的重组质粒pY16TEF1‑△SPT15‑125及其应用。本发明一种重组质粒pY16TEF1‑△SPT15‑125，所述的重组质粒pY16TEF1‑△SPT15‑125中的△SPT15‑125是SPT15基因经过突变后获得，△SPT15‑125碱基序列为SEQ ID No.2，其所翻译的转录因子spt15p的氨基酸序列为SEQ ID No.3；所述的序列SEQ ID No.2中发生突变的碱基分别为39a>g，128 a>g，156a>g、163a>g、247a>g、653a>g；所述的序列SEQ ID No.3中发生突变的氨基酸分别为Glu43Gly，Lys55Glu,Lys83 Glu,Lys218Arg；所述的携带重组质粒pY16TEF1‑△SPT15‑125的酿酒酵母在提高乙醇产率中的应用。本发明可提高酿酒酵母乙醇产率。
- 一种体外蛋白合成体系、试剂盒及其制备方法-201711452033.X
- 郭敏;徐开;陈鉴冰;周子鉴;柴智;章小铃;王海鹏;于雪 - 康码（上海）生物科技有限公司
- 2017-12-28 - 2019-07-05 - C12N15/81
- 本发明提供了一种体外蛋白合成体系、试剂盒及其制备方法，具体地，本发明由特定比例的(a)细胞提取物；和(b)第一反应促进剂混合所形成的无细胞的体外蛋白合成体系可显著提高外源蛋白的合成效率。
- 一种毕赤酵母中异源表达内切葡聚糖酶EGⅡ，EGⅣ，EGⅤ的构建方法-201910230812.8
- 钟成;舒月力;李栋梁 - 天津科技大学
- 2019-03-26 - 2019-07-05 - C12N15/81
- 本发明的目的在于构建一种异源表达EGⅡ，EGⅣ，EGⅤ蛋白的重组毕赤酵母,具体步骤如：(1)里氏木霉RNA和CDNA的获得:固体诱导培养基获得菌丝体，试剂盒提取总RNA和cDNA；(2)目的基因的克隆:用合理引物PCR扩增出目的基因；(3)构建表达载体:以Ppic9k为载体,将目的基因插入启动子AOX1下游,5'和3'端酶切位点分别为EcoRⅠ，NotⅠ；(4)获取重组菌株:以bglⅠ为表达载体的线性化位点,实现表达载体线性化,电转，得到重组酵母；(5)重组菌株的诱导产酶：摇瓶发酵，用适当甲醇诱导产酶；(6)重组蛋白活性检测：利用SDS‑PAGE及刚果红‑CMC检测重组蛋白的表达量及活性。本方法构建的重组菌株能高效表达带his标签的蛋白，能得到高效单酶组分。
- 用于高通量酵母双杂交技术的重组载体及其大规模筛选互作蛋白的方法-201610436290.3
- 曹罡;杨芳;周美玲;雷莹莹;姚琪利;韩以超;朱成航;伍享;戴金霞;宋云峰;陈西;曾思华;傅振芳 - 华中农业大学
- 2016-06-17 - 2019-07-05 - C12N15/81
- 本发明公开了一种用于酵母双杂交的相关重组载体及其利用高通量测序技术大规模筛选互作蛋白的酵母双杂交的方法，该方法依赖于一种整合酶Integrase phiC31(En)的特有整合功能，通过对传统酵母双杂交载体的改造，使其与高通量测序技术有机结合，实现成百上千的Bait蛋白同时对Prey蛋白文库的筛选工作。将整合酶及其特异识别的核苷酸序列插入Matchmaker GAL4系统的载体中，通过酵母双杂交的方法使重组载体进入同一个酵母细胞，整合酶发生作用，将其特异识别的核苷酸序列及其紧邻的核苷酸序列进行特异性定向重排，从而使得两个重组载体融合成一个融合载体，此时猎物和诱饵蛋白序列被定向连接成融合载体上的一段新的序列，通过扩增、高通量测序，从而经济高效地筛选相互作用蛋白质并构建全面的蛋白互作网络图谱。
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