[发明专利]一种β-内酰胺酶保护剂及制备方法

摘要

本发明公开了一种β‑内酰胺酶保护剂，所述β‑内酰胺酶保护剂以酶活力单位(万单位，wu)计由以下成分组成：Dextran20 0.1‑0.6mg/wu，海藻糖0.5‑2mg/wu，山梨醇D 0.1‑0.6mg/wu，L‑组氨酸0.2‑1mg/wu，L‑精氨酸0.2‑1mg/wu，L‑抗坏血酸磷酸酯钠盐0.01‑0.06mg/wu，吐温20 0.02‑0.06mg/wu，ZnSO₄0.002‑0.006mg/wu。上述成分用适量PH7.0柠檬酸盐缓冲液溶解，使用时加入1万单位(wu)β‑内酰胺酶。本发明的保护剂中多糖类和醇类与酶形成多羟基氢键结构，替代水分子维持酶的空间结构稳定；氨基酸类保护酶的丝氨酸、组氨酸及半胱氨酸活性中心；甘油为常用的保水剂；Zn²⁺是酶的激活剂；吐温20是非离子表面活性剂，常作为酶促反应的酶活性保护剂。经过加酶产品的酶活稳定性验证，本发明的保护剂可以大大减少酶活力损失，保持酶活性的相对稳定。

主权项

1.一种β‑内酰胺酶保护剂及制备方法，其特征在于所述β‑内酰胺酶保护剂以酶活力单位(万单位，wu)计由以下成分组成：Dextran20 0.1‑0.6mg/wu，海藻糖0.5‑2mg/wu，山梨醇D 0.1‑0.6mg/wu，L‑组氨酸0.2‑1mg/wu，L‑精氨酸0.2‑1mg/wu，L‑抗坏血酸磷酸酯钠盐0.01‑0.06mg/wu，吐温20 0.02‑0.06mg/wu，ZnSO40.002‑0.006mg/wu。所述β‑内酰胺酶保护剂的制备方法，包括以下步骤：(1)以酶活力1万单位计，精确称取所需量的Dextran20、海藻糖、D‑山梨醇、L‑组氨酸、L‑精氨酸、ZnSO4置于三角瓶或配制罐中，加入适量0.05M柠檬酸盐缓冲液(PH7.0)，100‑150rpm搅拌使之溶解。(2)在上述溶液中加入所需量的L‑抗坏血酸磷酸酯钠盐、吐温20，100‑150rpm搅拌10‑15min使之混合均匀，即得β‑内酰胺酶保护剂溶液。(3)控制β‑内酰胺酶保护剂溶液的PH＝7.0±0.2，其溶液体积≤生产配制溶液体积的2.5％。(4)所需量的β‑内酰胺酶先用适量PH7.0柠檬酸盐缓冲液溶解，控制酶溶液的体积≤生产配制溶液体积的0.5％，加入保护剂溶液中，100‑150rpm搅拌10‑15min使之混合均匀，得到含酶的保护剂溶液。(5)含酶的保护剂溶液用0.22um滤膜除菌过滤。控制含酶的保护剂溶液总体积≤生产配制溶液总体积的3％。