[发明专利]一种分离纯化重组LEA蛋白的方法及试剂盒在审
| 申请号： | 201910745136.8 | 申请日： | 2019-08-13 |
| 公开（公告）号： | CN110468172A | 公开（公告）日： | 2019-11-19 |
| 发明（设计）人： | 王建业;章志国;罗桂英;朱孔福;沈兵;曹云霞 | 申请（专利权）人： | 安徽医科大学第一附属医院 |
| 主分类号： | C12P21/00 | 分类号： | C12P21/00;C07K1/36;C07K1/30;C07K1/22;C12R1/19 |
| 代理公司： | 34122 合肥鼎途知识产权代理事务所(普通合伙) | 代理人： | 徐然<国际申请>=<国际公布>=<进入国 |
| 地址： | 230022 *** | 国省代码： | 安徽;34 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种分离纯化重组LEA蛋白的方法及试剂盒，本发明通过盐析去除杂蛋白、采用Ni‑NTA柱亲和层析分离纯化重组LEA蛋白，省去了复杂分子筛的纯化步骤，提高了制备效率，缩短了纯化时间，降低了制备成本。本发明大幅提高了LEA蛋白分离产量，并保持了LEA蛋白结构完整性以确保在应用中应有的蛋白活性。 | ||
| 搜索关键词： | 分离纯化 制备 分子筛 结构完整性 去除杂蛋白 柱亲和层析 蛋白活性 试剂盒 盐析 应用 | ||
【主权项】：
1.一种分离纯化重组LEA蛋白的方法，其特征在于，包括如下步骤：/na)、将重组LEA质粒转化到Rosseta表达菌株，IPTG诱导目标蛋白表达；/nb)、经细胞破碎处理所述的菌株样品并获得包含所述LEA蛋白的裂解液；/nc)、向裂解液中加入硫酸铵以去除杂质蛋白来获取包含所述蛋白的第一次纯化液；/nd)、经Ni-NTA亲和层析处理所述第一次纯化液，通过至少一次咪唑溶液洗脱收集包含所述LEA蛋白的洗脱液。/n
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