[发明专利]一种原核表达重组鸡血管生成素样蛋白4的方法与应用在审
| 申请号： | 201910899778.3 | 申请日： | 2019-09-23 |
| 公开（公告）号： | CN110564756A | 公开（公告）日： | 2019-12-13 |
| 发明（设计）人： | 赵旭;黄华山;苏闪闪 | 申请（专利权）人： | 临沂大学 |
| 主分类号： | C12N15/70 | 分类号： | C12N15/70;C07K14/515;C07K19/00;A61D7/00;C12R1/19 |
| 代理公司： | 11512 北京迎硕知识产权代理事务所(普通合伙) | 代理人： | 钱扬保;张群峰 |
| 地址： | 276000*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | 本发明提供一种原核表达重组鸡ANGPTL4蛋白的方法，包括如下步骤：(1)人工合成重组鸡ANGPTL4的基因序列，将基因序列构建到原核表达载体中，构建重组原核表达载体；(2)将重组原核表达载体转化大肠杆菌E.coli感受态细胞，筛选阳性菌落；(3)将重组阳性质粒单菌落扩大培养，加入诱导剂进行诱导表达；(4)采用稀释复性方法进行包涵体复性；(5)将包涵体复性蛋白进行纯化。本发明通过构建重组鸡ANGPTL4的原核表达载体，使重组鸡ANGPTL4在大肠杆菌中高效表达，表达的重组蛋白以包涵体的形式存在，经包涵体复性和复性蛋白纯化，促进了蛋白的正确折叠，提高融合蛋白表达量。本发明的重组鸡ANGPTL4蛋白可调节肉鸡的脂肪代谢，为今后鸡ANGPTL4功能研究的开展提供良好的试验材料。 | ||
| 搜索关键词： | 包涵体复性 蛋白 构建 重组原核表达载体 原核表达载体 大肠杆菌 基因序列 感受态细胞 复性蛋白 高效表达 功能研究 扩大培养 融合蛋白 试验材料 稀释复性 阳性菌落 阳性质粒 诱导表达 原核表达 脂肪代谢 重组蛋白 包涵体 表达量 单菌落 可调节 诱导剂 折叠 肉鸡 筛选 转化 | ||
【主权项】：
1.一种原核表达重组鸡ANGPTL4蛋白的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：/n(1)人工合成重组鸡ANGPTL4的基因序列，将基因序列构建到原核表达载体中，构建重组原核表达载体；/n(2)将重组原核表达载体转化大肠杆菌E.coli感受态细胞，筛选阳性菌落；/n(3)将重组阳性质粒单菌落扩大培养，加入诱导剂进行诱导表达；/n(4)采用稀释复性方法进行包涵体复性；/n(5)将包涵体复性蛋白进行纯化。/n
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- 吴辉;赖宁玉;赵舒欣;王文卓;黎冠忠 - 华东理工大学
- 2019-09-27 - 2019-12-13 - C12N15/70
- 本发明提供一种利用乙酸或其盐生产3‑羟基丙酸的代谢工程大肠杆菌菌株的构建方法，在利用乙酸或其盐经乙酰‑CoA羧化酶和丙二酰‑CoA还原酶生产3‑HP代谢途径的基础上进一步改造，包括以下两种途径中的一种或两种：(1)抑制脂肪酸合成并促进乙醛酸循环以增加流向目标代谢产物的乙酰‑CoA和丙二酰‑CoA代谢流并增强能量代谢；(2)抑制脂肪酸合成途径以增加流向目标代谢产物的乙酰‑CoA和丙二酰‑CoA代谢流。本发明通过在已构建的外源表达3‑HP途径基础上，对代谢途径和调控的分析，利用基因工程手段对大肠杆菌进行改造，获得的菌株在以乙酸或其盐为碳源的培养基中生产3‑HP，得率可达0.38g/g，为最大理论产量的50.7％。
- 制备无融合标签包涵体蛋白纳米颗粒的方法-201610529226.X
- 熊思东;齐兴梅 - 苏州大学
- 2016-07-07 - 2019-12-13 - C12N15/70
- 本发明涉及一种制备无融合标签包涵体蛋白纳米颗粒的方法，包括以下步骤：将自发断裂蛋白质内含子的C端与目的蛋白基因融合，N端与增强目的蛋白表达的标签蛋白融合，得到融合蛋白编码基因；将融合蛋白编码基因在大肠杆菌中诱导表达，通过自发断裂蛋白质内含子的C端自发断裂，释放所述目的蛋白，形成包涵体蛋白；将大肠杆菌细胞破碎，离心，弃掉上清液，得到无融合标签包涵体蛋白纳米颗粒。本发明解决了在包涵体蛋白颗粒水平上实现标签蛋白的移除，填补了制备无标签包涵体蛋白纳米颗粒的技术空白，并且蛋白质内含子的自发断裂在大肠杆菌体内完成，后处理简单。
- 一种延缓皮肤衰老基因工程核酸因子膏的制备方法及使用方法-201910846754.1
- 王秀芳;闫丽芳;吕白雪;吉宁;苏利波;刘树锋;宋志学;吕占军 - 河北医科大学
- 2019-09-09 - 2019-12-10 - C12N15/70
- 本发明提供了一种延缓皮肤衰老基因工程核酸因子膏及使用方法；方法包括如下步骤：步骤一，无内毒素污染的基因工程小分子RNA制备：将表达人小RNA的DNA序列插入pET‑28α质粒中构建表达载体，将表达载体转化BL‑21菌，用IPTG诱导使转化的BL‑21菌产生人小RNA，用SDS‑NaCl提取无内毒素污染的人小RNA；步骤二，制备延缓皮肤衰老基因工程核酸因子膏：将制备的RNA进行干燥处理，与基质混合，加入透皮吸收剂，即制成了延缓皮肤衰老基因工程核酸因子膏。本发明从皮肤衰老的本质入手，用人小RNA调节皮肤细胞的基因表达，达到延缓皮肤衰老的目的，疗效明显，作用持久。
- 一种微生物生产丙酸的方法-201610227348.3
- 刘天罡;柳志杰;王艺璇;邓子新 - 武汉大学
- 2014-01-24 - 2019-12-10 - C12N15/70
- 本发明公开了一种微生物生产丙酸的方法，属于可再生能源和生物质能源以及化工原料生产领域。该方法是在微生物体内引入外源基因——丙二酰辅酶A还原酶基因、丙二酸半醛还原酶基因、3‑羟基丙酰辅酶A合成酶基因、3‑羟基丙酰辅酶A脱水酶基因和丙烯酰辅酶A还原酶基因，从而催化自身的丙二酰辅酶A得到丙酸；所述的微生物为大肠杆菌。本发明实现了改造微生物直接利用二氧化碳合成丙酸，不需利用石油资源来进行化学合成，减少了对石油的消耗和环境的污染，是一种可再生的、低消耗、环保的技术，可缓解当前的温室效应。本发明通过微生物固定二氧化碳生产丙酸可直接应用于工业生产。
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