[发明专利]一种提高无核葡萄杂交胚挽救成苗的方法

权利要求书

1.一种提高无核葡萄杂交胚挽救成苗的方法，其特征在于：包括以下步骤，

A.摘心环剥：无核葡萄母本新梢 长到6叶期，花序上留1叶进行摘心处理，在花前7-10天对顶副梢进行第二次摘心处理，其余副梢留1叶摘心，在初花期人工去雄前进行顶副梢摘心与结果枝的环剥；

B.杂交后取样、低温处理后接种胚珠：在初花期进行人工去雄授粉，在授粉后杂交种子败育的最佳取果期摘取幼果，幼果取回后4-6℃低温处理，3天，剥取胚珠接种，选择加入第一外源添加物的B5液体培养基，25℃暗培养80-90天，第一外源添加物为1-2.5mg/L的IBA、0.5-1.5mg/L的GA3、0.1-0.5mg/L的6-BA、50-65g/L的蔗糖、0.5-1.5g/L的活性炭；

C.取裸胚接种：取胚珠，胚珠纵切剥取白色裸胚，接种到加入了第二外源添加物的WPM培养基上，光培养，第二外源添加物为0.4-0.8mg/L的6-BA、20-40g/L的蔗糖、1-2g/L的活性炭；

D.继代扩繁：将30-40天苗龄的胚挽救试管苗，双芽茎段接种在继代培养基1/2WPM上，继代培养基1/2WPM上加入第三外源添加物，第三外源添加物为0.1-0.5mg/L的IBA、20-40g/L的蔗糖、2-3g/L的活性炭，光培养得试管苗；

E.炼苗：对试管苗进行炼苗；

步骤E中，炼苗方式为，试管苗移到室内自然光条件下培养2天；打开瓶盖培养2天；取出试管苗、洗净根系上培养基，栽入已装好用70％甲基托布津和1000倍灭菌泥炭的营养钵中，苗上盖塑料杯保湿，时间为7天；移到设施条件下长出2片新叶后定植，苗床土壤用30％恶霉灵消毒，即得到无核葡萄杂交苗植株。

2.根据权利要求1所述的提高无核葡萄杂交胚挽救成苗的方法，其特征在于：步骤B中，授粉后杂交种子败育的最佳取果期为火焰无核葡萄和寒香蜜杂交为授粉后33-36天，或奥迪亚无核葡萄和碧香无核杂交为授粉后38-40天。