[发明专利]一种用于检测西瓜细菌性果斑病菌的引物对及其应用

权利要求书

1.一种用于检测西瓜细菌性果斑病菌(Acidovorax citrulli)的引物对，其特征在于，包括上游引物和下游引物，其核苷酸序列分别为：

上游引物：5’-TTCACCGACTACACCAGTGC-3’；

下游引物：5’-CATCAGTTCGTAGTGGCGGT-3’。

2.如权利要求1所述的引物对在检测西瓜细菌性果斑病菌(Acidovorax citrulli)中的应用。

3.如权利要求1所述的引物对在制备检测西瓜细菌性果斑病菌(Acidovoraxcitrulli)的试剂盒中的应用。

4.如权利要求3所述的应用，其特征在于，所述试剂盒还包括：PCR缓冲液、Taq聚合酶。

5.一种检测西瓜细菌性果斑病菌(Acidovorax citrulli)的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)以待测样品的DNA作为扩增模板，采用权利要求1所述的引物对，建立PCR反应体系，进行PCR扩增；

(2)检测扩增产物，若扩增出102bp的DNA片段，则判断待测样品中含有西瓜细菌性果斑病菌(Acidovorax citrulli)；否则，则判断待测样品中不含西瓜细菌性果斑病菌(Acidovorax citrulli)。

6.如权利要求5所述的检测西瓜细菌性果斑病菌(Acidovorax citrulli)的方法，其特征在于，扩增模板采用细菌、提取的细菌DNA或含有细菌/细菌DNA的粗提液。

7.如权利要求5所述的检测西瓜细菌性果斑病菌(Acidovorax citrulli)的方法，其特征在于，以每25μL计，PCR反应体系组成为：40ng/μL的DNA模板1μL、10μM的上游引物1μL、10μM的下游引物1μL、2×Taq PCR Mix 12.5μL、无菌超纯水补足。

8.如权利要求5所述的检测西瓜细菌性果斑病菌(Acidovorax citrulli)的方法，其特征在于，PCR扩增程序为：1)94℃预变性5min；2)94℃变30s，57℃退火30s，72℃延伸30s，35个循环；3)72℃延伸5min，4℃终止反应。

9.如权利要求5所述的检测西瓜细菌性果斑病菌(Acidovorax citrulli)的方法，其特征在于，利用琼脂凝胶电泳技术检测PCR扩增产物。