[发明专利]一种用塑料薄膜袋充气培养双小核草履虫的方法

摘要

本发明公开了一种用塑料薄膜袋充气培养双小核草履虫的方法，属水产养殖领域。本技术要点是先配制草履虫培养液，后在塑料薄膜袋中充气培养，并在培养的最后4天补充投喂2种淡水微藻-雷氏衣藻和蛋白核小球藻。与传统技术相比，本发明创新性表现在：采用塑料袋培养草履虫，草履虫生长快，体质健壮，产量高；塑料袋透光性好，可重复使用，不易污染，操作方便，节约资金。

主权项

一种用塑料薄膜袋充气培养双小核草履虫的方法，其特征在于：步骤1 草履虫培养液的制备材料组合物重量份数比的配比如下玉米秸秆1份，花生壳3份，胡萝卜4份，西瓜皮2份，麸皮1份，猪血0.5份，蘑菇2份，木耳0.8份，蚯蚓粉0.2份，蚕蛹粉0.1份，奶粉0.3份，菠菜3份，羊粪2份，鸡粪1份，牛粪4份，煮沸冷却然后磁化的淡水1000份；室温下(15‑27℃)浸泡72小时，期间每隔6小时搅拌、翻动一次，最后将固形物捞出并摒弃，余下的液体静置、沉淀24小时，弃渣滓，上清液用100目筛绢过滤，再弃渣，滤液即为草履虫培养液；步骤2 双小核草履虫饵料微藻的制备微藻培养液按重量份数比配方如下：猪粪浸出液3份，NH₄NO₃0.25份，KH₂PO₃0.005份，1％的FeC₆H₅O₇溶液0.1份，维生素B₁0.0001份，维生素B₁₂0.00005份，人尿0.8份，含氨25‑28％的氨水1份，硫衣尿素0.2份，氯化铵0.1份，硫酸钠0.5份，氯化钾0.8份，异丁叉二脲0.3份，草酰胺0.4份，偏磷酸钾0.01份，多胺0.0001份，脱落素0.005份，碳酸氢钾5份，土壤浸出液1.2份，甲壳素0.01份，煮沸冷却后的磁化淡水1000份；取2个3000毫升的平底圆形烧瓶，用试管刷洗刷干净，再用蒸馏水冲洗3遍，橡胶塞上打上2个孔，插入2根玻璃管，玻璃管内经5‑6毫米，一根较长，为进气管，插入到接近瓶底，另一根较短，为出气管，两端露出橡胶塞3‑5厘米；第2个瓶的充气管与第一个瓶的排气管以较软的橡胶管或乳胶管相连，这样充入的气体可以得到2次利用；每个瓶加入微藻培养液1500毫升，取纯种、生长活泼、无污染、指数生长期的雷氏衣藻和蛋白核小球藻分别接种，进行混合培养，接种密度雷氏衣藻3万个细胞/毫升，蛋白核小球藻20万个细胞/毫升，将此2个烧瓶放进微藻培养室培养，充气管上端通过较软的塑料管或乳胶管与空压机相连，充气培养，充气量2‑3升/分钟，使培养藻液保持较高溶氧并使得藻细胞悬浮不下沉即可；微藻培养室用空调控温，普通日光灯管提供照明，共培养9天，培养的前3天，调节温度至20‑21℃，光照强度5000lux，培养的第4‑6天，调节温度至24‑25℃，光照强度8000lux，培养的第7‑9天，调节温度至28‑30℃，光照强度100001ux。培养至第6天，每个瓶添加100毫升新鲜培养液以补充消耗掉的营养盐，第7天，每个瓶添加50毫升磁化后的蒸馏水，以补充因充气挥发掉的水分并稀释藻液；培养至第9天，雷氏衣藻密度可达50万个细胞/毫升，蛋白核小球藻密度可达1200万个细胞/毫升，停止培养，拔掉管子，将藻液保存在通风、黑暗、4℃环境中，准备用来投喂双小核草履虫；步骤3 双小核草履虫培养方法取2个小口、可装水30升的塑料薄膜袋(市场有售，水产业上常此袋充满氧气来运输鱼苗)，每个袋子加入步骤1所述草履虫浓缩培养液8升，再加入磁化蒸馏水7升，摇匀，然后取健康、活泼的双小核草履虫接种，接种密度3000‑5000个/毫升，袋口插入两根内经为5‑6毫米的硬质料管，一根长75厘米，为充气管，插入较深，接近袋子底部，另一根较短，长30厘米，两端露出袋口即可，为排气管，第一个袋子的排气管通过较柔软的塑料管或橡胶管与第二个袋子的充气管相连，这样充入的气体得到二次利用；两个塑料袋都在细脖处用细绳扎住，以防漏气；第一个袋子的充气管通过较软的橡胶管、塑料管或乳胶管与空压机相连，充入混合气体，充气量3‑5升/分钟，气体成分和比例为V_空气+V_纯氧气+V_{纯二氧化碳}＝98％+1％+1％(体积比)；将此培养设备安装在室内，室内空调控温，节能灯照明，调节温度为27℃，光照强度6000lux，共培养10天，到第6天，添加步骤1所述培养液0.5升，以补充消耗掉的营养物质，第7‑10天，每个塑料袋每天添加步骤2所述藻液0.8升，以补充鲜活饵料，确保草履虫生长所需的维生素和微量元素；到第10天，草履虫密度可达30‑40万个细胞/毫升，培养完毕。