[发明专利]一种海参花碱性磷酸酶的提取方法

摘要

一种海参花碱性磷酸酶的提取方法，属于酶学领域。所述方法如下：取海参花，清洗干净，沥干水分；将海参花均匀的涂在平皿上进行冻干；将海参花冻干粉装入超临界CO₂萃取设备的进料釜中萃取分离；向海参花冻干粉中加入Tris‑HCl缓冲液均质离心，得到海参花ALP粗酶液；将海参花ALP粗酶液进行阴离子交换层析，填料为DEAE‑阴离子层析介质。本发明的优点是：海参花经过冷冻干燥后，去除掉多余的水分，再经超临界CO₂萃取，去除掉多余的脂肪，同时实现了排除水分和脂肪的干扰，并且还具有一定的杀菌作用，解决传统提取工艺中有机溶剂残留等问题，具有更好的碱性磷酸酶的提取和纯化效果。

主权项

1.一种海参花碱性磷酸酶的提取方法，其特征在于：所述方法具体步骤如下：步骤一：取新鲜海参花，清洗干净，沥干水分；步骤二：将步骤一得到的海参花均匀的涂在平皿上进行冻干，厚度为3~5mm，使其水分低于5％，磨粉，放入‑80℃冰箱中保存待用；步骤三：将海参花冻干粉装入超临界CO₂萃取设备的进料釜中，设置萃取压力为20MPa，分离压力为8MPa，萃取分离同时进行，总时间为1.5~2h，保留进料釜中的海参花冻干粉；步骤四：向步骤三得到的海参花冻干粉中加入Tris‑HCl缓冲液，用均质机均质15min，均质后放入超声波设备，超声后用磁力搅拌器搅拌溶解，将溶解好的海参花混合液离心，得到的上清液用饱和度为70％的硫酸铵进行沉淀蛋白，离心后取沉淀用50mM/L Tris‑HCl pH 8.9缓冲液溶解，经脱盐处理后得到海参花ALP粗酶液；步骤五：将海参花ALP粗酶液进行阴离子交换层析，填料为DEAE‑阴离子层析介质，具体为：①使用平衡液平衡层析柱，样品上柱，然后用平衡液再平衡；所述的平衡液为50Mm/L Tris‑HCl pH 8.9；②进行梯度洗脱，缓冲液A为50 mM/L Tris‑HCl pH 8.9，缓冲液B为50mM/L Tris‑HCl pH 8.9+0.8M/L NaCl，设置洗脱梯度时间为60min，洗脱流速为5ml/min；收集洗脱液，检测酶活，将酶活为50U/mL的洗脱液合并，浓缩至6mL过Chromdex S‑200 PG 层析柱，将活力峰收集后浓缩‑80℃冷冻保藏。