[发明专利]无动物源性和人源性成分的狂犬病疫苗的制备方法

摘要

本发明提供了一种无动物源性和人源性成分的狂犬病疫苗的制备方法，包括以下步骤：A.采用第一无血清培养基a，建立无血清Vero细胞主细胞库和工作细胞库；B.采用第二无血清培养基b，建立无血清人用狂犬病疫苗毒株工作种子批；C.将步骤A的Vero工作细胞库的细胞复苏、传代扩增后接种生物反应器，采用第三无血清培养基c1，载体灌流培养；接种步骤B的毒株工作种子批，采用第四无血清培养基c2，培养病毒；收获病毒液，经超滤浓缩、病毒液灭活、纯化、半成品配制后分装冻干，得到无动物源性和人源性成分的狂犬病疫苗。本发明采用无血清培养替代现有有血清培养工艺、重组人血白蛋白替代现有人血白蛋白工艺，保证了生物制品安全性。

主权项

1.一种无动物源性和人源性成分的狂犬病疫苗的制备方法，其特征在于：所述方法包括以下步骤：A.采用第一无血清培养基a，进行Vero细胞的复苏、传代和冻存，建立无血清Vero细胞主细胞库和工作细胞库；B.将步骤A建立的无血清Vero细胞工作细胞库的冻存无血清Vero细胞进行复苏、传代扩增，然后接种人用狂犬病疫苗毒株，采用第二无血清培养基b培养扩增至病毒高峰，收获病毒液冻存，建立无血清人用狂犬病疫苗毒株工作种子批；C.将步骤A建立的无血清Vero细胞工作细胞库的冻存无血清Vero细胞复苏、传代扩增后接种至生物反应器，采用第三无血清培养基c1，载体灌流培养细胞；在细胞的数量达高峰时，接种步骤B的无血清人用狂犬病疫苗毒株工作种子批，采用第四无血清培养基c2，培养病毒；然后收获病毒液，经超滤浓缩、病毒液灭活和水解、纯化、半成品配制后分装冻干，得到所述无动物源性和人源性成分的狂犬病疫苗；其中，在步骤A中，所述第一无血清培养基a为含5～7g/L Sheff‑VAX Plus ACF的VP‑SFM；在步骤B中，所述第二无血清培养基b为含8～10g/L Sheff‑VAX Plus PF ACF VP的VP‑SFM；在步骤C中，所述第三无血清培养基c1为含9～15g/L Sheff‑VAX Plus ACF的VP‑SFM，所述第四无血清培养基c2为含6～8g/L Sheff‑VAX Plus PF ACF VP的VP‑SFM。