[发明专利]一株羊肠道病毒的分离鉴定方法及应用

摘要

本发明公开了一株羊肠道病毒的分离鉴定方法及应用，利用宏基因组测序技术，从我国某养殖场死亡湖羊组织中获取CEV全基因组序列，与GenBank数据库CEV基因组序列进行比对分析，并利用RNA转染BHK‑21细胞的方法分离病毒，使用RT‑PCR方法、基因测序和透射电镜技术进行毒株分离鉴定，病毒液灭活后制备成疫苗，免疫兔子制备CEV阳性血清；宏基因组学方法测得CEV的全基因组核苷酸序列长度为7446nt，其中5′UTR长为821nt，3′UTR长为109nt，ORF长为6516nt，与已公布的CEV序列的核苷酸同源性为75.1％‑86.5％，为G种肠道病毒，毒株命名为JSNT/1/2022株。本发明中利用RNA转染BHK‑21细胞的方法成功分离出CEV，且具有良好的免疫原性，这是首次将利用RNA转染细胞的方法分离出CEV，为CEV的基础研究和应用研究奠定了基础。