[发明专利]一种人胚胎干细胞定向分化为造血干细胞的方法有效
申请号: | 201510010889.6 | 申请日: | 2015-01-09 |
公开(公告)号: | CN104622901B | 公开(公告)日: | 2019-06-28 |
发明(设计)人: | 周萱 | 申请(专利权)人: | 奥思达干细胞有限公司 |
主分类号: | C12N5/0735 | 分类号: | C12N5/0735;C12N5/0789;A61K35/28;A61P35/02 |
代理公司: | 暂无信息 | 代理人: | 暂无信息 |
地址: | 214125 江苏省*** | 国省代码: | 江苏;32 |
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摘要: | 本发明公开了一种治疗急性淋巴样白血病的干细胞制剂及其制备方法,具体地说所述的干细胞制剂是一种由胚胎干细胞在体外诱导生成的造血干细胞制备而成,所述的干细胞制剂中至少包括(1‑5)×106个源于胚胎干细胞的造血干细胞,一种治疗急性淋巴样白血病的干细胞制剂的制备方法包括如下步骤:(1)人胚胎干细胞的传代培养,(2)造血干细胞拟胚体的形成,(3)人胚胎干细胞向造血干细胞分化,(4)造血干细胞的培养和传代及检测,(5)干细胞制剂的制备。 | ||
搜索关键词: | 干细胞制剂 造血干细胞 制备 人胚胎干细胞 急性淋巴样白血病 胚胎干细胞 造血干细胞分化 传代 传代培养 定向分化 体外诱导 拟胚体 治疗 检测 | ||
【主权项】:
1.一种人胚胎干细胞向造血干细胞分化的方法,主要包括以下步骤:胚胎干细胞的传代培养,造血细胞拟胚体的形成,人胚胎干细胞向造血干细胞分化,造血干细胞的培养和传代及检测;其中,(1)所述的胚胎干细胞的传代培养的步骤具体为:常规培养胚胎干细胞进行传代和扩增,此阶段培养基为:DMEM培养基为基础培养基,添加15%胎牛血清或血清替代品,1mmol/L必需氨基酸,50IU/mL青霉素,10μg/mL链霉素和4ng/mL碱性成纤维细胞生长因子;(2)所述的造血细胞拟胚体的形成:在传代培养6‑7天对胚胎干细胞进行诱导,用1mg/mLⅣ型胶原酶吹打成小细胞团,然后使用超低黏附6孔培养板培养7天,每2天换液一次,在拟胚体形成阶段80%DMEM培养基为基础培养基,添加20%胎牛血清或血清替代品,1mmol/L必需氨基酸,50IU/mL青霉素,10μg/mL链霉素,在拟胚体EBs形成阶段的第5‑7天,在培养基中添加4种定量的制剂,分别是丝裂霉素,浓度为0.1mM;维生素C,浓度为1×104mol/L;L‑谷氨酰胺,浓度为2mM;β‑巯基乙醇,浓度为0.1mM;(3)所述的人胚胎干细胞向造血干细胞分化的步骤具体为:拟胚体培养7天后,在显微镜下观察是否有红细胞出现,红细胞团用拉细的玻璃吸管机械切割并进行单细胞传代培养; (4)所述的造血干细胞的培养和传代及检测的步骤具体为:将上述成功诱导生成的造血干细胞消化、终止消化反应,进行传代培养,并进行流式细胞仪检测阳性标记物CD34达到99%以上,此阶段培养基为DMEM培养基为基础培养基,添加15%胎牛血清或血清替代品,1mmol/L必需氨基酸,50IU/mL青霉素,10ug/mL链霉素; 取生长良好的第三代细胞进行检测:收集第三代细胞,1500rpm离心10min,弃上清,加PBS溶液重悬,吸取100μL细胞悬液加入EP管内,按量分别加入检测抗体;避光孵育30min,每样品管加入2mlPBS洗一次,1500rpm离心5min;弃上清,每样品管加300μLPBS溶液重悬,进行流式检测。
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- 本发明提供一种用于胚胎干细胞培养的组合物,其能确保胚胎干细胞长期处于未分化状态并具有无限增殖的能力。其包括白血病抑制因子(LIF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、Rho激酶抑制剂Y27632、骨形态发生蛋白抑制剂Noggin。本发明还提供了包含该组合物的细胞培养液及其应用。
- 一种三维复合细胞聚集体模型及其制备方法与应用-201510072086.3
- 杨军;张妍;李素华;徐建斌 - 南开大学
- 2015-02-11 - 2018-10-12 - C12N5/0735
- 本发明提供了一种三维复合细胞聚集体模型及其制备方法与应用,该模型以天然或化学合成聚合物为基质材料,制备亚微米级微球,内部包埋或表面固定细胞因子,与细胞共培养,形成含有微球的复合细胞聚集体,实现由内而外调控聚集体内细胞生物学活性。该模型可用于干细胞三维状态下增殖、分化的研究,克服了传统干细胞三维培养时由于培养基中液性因子传质不均、作用时间短而导致的细胞聚集体组成/结构非均质、细胞增殖效率低及定向诱导分化效率低的问题,可在三维立体仿生条件下模拟细胞‑细胞、细胞‑细胞外基质以及细胞‑可溶性因子间的相互作用,为体外构建和优化干细胞培养技术,以及组织工程化构建各类组织器官类似物或等同物提供理论和技术支持。
- 胎盘提取干细胞装置-201820000773.3
- 占天焱;唐晓艳;沈丽;邓钺 - 北京弘润天源生物技术股份有限公司
- 2018-01-02 - 2018-10-12 - C12N5/0735
- 本实用新型公开了一种胎盘提取干细胞装置,涉及医疗设备领域,该胎盘提取干细胞装置在使用时可将瓶盖旋紧在储存瓶上,然后用插管切割下一块胎盘,并且将胎盘碎块通过插管漏入储存瓶内,打开电机带动破碎刀将胎盘碎块搅碎,然后往储存瓶倒入酶液,将胎盘进行酶液消化。该胎盘提取干细胞装置可以完成胎盘的切割、破碎、酶液消化步骤,尽量降低感染细菌,而且提高了干细胞的提取效率。
- 一种分离并激活人外周血极小胚胎样干细胞的方法-201810441922.4
- 陈继冰;王雪莹 - 广州四叶草健康科技有限公司
- 2018-05-10 - 2018-09-28 - C12N5/0735
- 本发明公开了一种分离并激活人外周血极小胚胎样干细胞的方法,其包括以下步骤:S1、采集外周血,分离出血浆和细胞;S2、将步骤S1所得血浆放入超声清洗仪中进行破碎,得到血浆裂解物;S3、将步骤S1所得细胞进行重悬与清洗,并冷藏保存;S4、将部分步骤S2所得血浆裂解物装入第一血袋中,将剩余部分血浆裂解物与步骤S3所得细胞混合,过滤,得到极小胚胎样干细胞,再装入第一血袋中,得到激活的极小胚胎样干细胞,并排掉第一血袋中的气体后密封。本发明的步骤简单,操作方便,其分离得到的极小胚胎样干细胞纯度可达到91%,活性可达到85%。
- 专利分类
- 病毒唑在制备治疗急性淋巴细胞白血病的药物中的用途
- 伴有add(11)(q23)染色体异常的高侵袭性人急性B淋巴细胞白血病细胞株
- 噻唑衍生物在治疗非淋巴细胞性白血病中的应用
- 一种人急性B淋巴细胞白血病糖皮质激素耐药细胞株及其构建方法和应用
- 一种人急性B淋巴细胞白血病细胞株及其应用
- 检测KIAA0125基因表达水平的物质在辅助鉴定急性淋巴细胞白血病中的应用
- NF-κB信号通路抑制剂在制备抑制急性淋巴细胞性白血病复发的药物中的应用
- ATM抑制剂在制备抑制急性淋巴细胞性白血病复发的药物中的应用
- 隐丹参酮在制备Ph+急性淋巴细胞白血病化疗增敏药物中的应用
- 穿心莲内酯与地塞米松联用在制备复方抗急性淋巴细胞白血病药物中的应用