[发明专利]一种在胶中形成汗腺样结构的方法

摘要

本发明公开了一种在胶中形成汗腺样结构的方法。具体为先将非细胞胶和细胞胶的pH都调整为7；将非细胞胶凝固；在细胞胶中加入两种细胞，分别是成纤维细胞和汗腺（样）细胞；将混有细胞的细胞胶接种在非细胞胶上，置于培养箱中37度30分钟，待其凝固。细胞胶凝固后加入含有50ng/ml EGF的Epilife培养基，培养基没过胶的表面，大约5ml；维持5‑7天，待胶稳定，隔天换液。采用本发明的方法可使用汗腺细胞和汗腺样细胞在胶中形成符合正常人汗腺组织的汗腺样结构，为大面积烧伤病人的救治提供足够数量的汗腺组织，从而改善病人的生活质量。同时也为研究汗腺的分化发育提供了理论依据，具有潜在的临床应用前景。

主权项

1.一种在胶中形成汗腺样结构的方法，其特征在于，由以下步骤组成：（1）调整非细胞胶的pH为7，然后于室温下凝固非细胞胶；（2）调整细胞胶的pH为7，然后将成纤维细胞与待诱导细胞加入细胞胶中；所述成纤细胞与待诱导细胞的数量比例为1∶2～3；（3）将步骤（2）的混有细胞的细胞胶接种在步骤（1）凝固的非细胞胶上，置于培养箱中，至细胞胶凝固；（4）细胞胶凝固后再加入培养基；隔日更换一次培养基，通过染色检测汗腺样结构的形成程度，最终得到汗腺样结构；所述非细胞胶包含体积比为1∶1的胶原与基质胶，还包含添加剂；以1mL胶原计，所述添加剂及其用量为：10×MEM                  0.2mLL‑谷氨酰胺               1.8uL胎牛血清                 0.24mL氢氧化钠溶液             12uL所述细胞胶包含体积比为1∶1的胶原与基质胶，还包含添加剂；以1mL胶原计，所述添加剂及其用量为：10×MEM                  0.2mLL‑谷氨酰胺               18uL胎牛血清                 0.24mL氢氧化钠溶液             20uL所述培养基为含有50ng/mL表皮生长因子的上皮细胞培养液；步骤（3）中，非细胞胶与细胞胶的体积比为1∶（2.5～3.5）；步骤（4）中，培养基盖过细胞胶的表面， 所述上皮细胞培养液为Epilife培养基。