[发明专利]一种人脐血来源的调节性巨噬细胞及其分离纯化和培养方法有效
申请号: | 201510980113.7 | 申请日: | 2015-12-23 |
公开(公告)号: | CN105505874B | 公开(公告)日: | 2019-06-21 |
发明(设计)人: | 王维;马小倩;王佳 | 申请(专利权)人: | 中南大学 |
主分类号: | C12N5/0786 | 分类号: | C12N5/0786 |
代理公司: | 长沙市融智专利事务所(普通合伙) 43114 | 代理人: | 袁靖 |
地址: | 410083 湖南*** | 国省代码: | 湖南;43 |
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摘要: | 本发明提供了一种人脐血来源的调节性巨噬细胞及其分离纯化和培养方法。用密度梯度离心法分离得到脐血单个核细胞,通过CD14+免疫磁珠阳性分离获得富含调节性巨噬细胞的CD14+胞群。将成体外周血来源的调节性巨噬细胞与人脐血来源的调节性巨噬细胞在形态、产量、表型、功能等方面作对比。发现脐血来源的调节性巨噬细胞表型与成体外周血来源的调节性巨噬细胞类似,功能优于外周血来源的调节性巨噬细胞,因此可以建立在临床上供第三方使用的调节性巨噬细胞库。 | ||
搜索关键词: | 一种 人脐血 来源 调节 巨噬细胞 及其 分离 纯化 培养 方法 | ||
【主权项】:
1.一种人脐血来源的调节性巨噬细胞的分离纯化方法,其特征在于,用密度梯度离心法分离得到脐血单个核细胞,通过CD14+免疫磁珠阳性分离获得CD14+单核细胞;分离的单核细胞,在体外经过诱导培养7天后,得到调节性巨噬细胞;所述的人脐血来源的调节性巨噬细胞的培养方法,包括以下步骤:A. 重悬分离的单核细胞,细胞浓度为106个cells/3‑5 ml,放入促进细胞贴壁的培养皿中37℃,5% CO2培养,隔天换液;所述的调节性巨噬细胞培养基是在RPMI‑1640培养中添加10‑12%的人AB血清、5‑10 ng/ml的巨噬细胞集落刺激因子M‑CSF、1%青霉素和链霉素双抗;B.培养至第6天时加入终浓度为25‑50 ng/ml的干扰素IFN‑γ刺激18–24小时;C.培养至第7天,获得调节性巨噬细胞。
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- 本发明公开了一种过氧化氢诱导的猪肺泡巨噬细胞系氧化应激模型的建立方法,采用过氧化氢体外诱导处理猪肺泡巨噬细胞系,过氧化氢浓度为10‑350μM。与现有技术相比,本发明首次使用猪肺泡巨噬细胞系作为过氧化氢诱导氧化应激模型的造模细胞,通过考察细胞死亡率和细胞内ROS水平确定了H2O2溶液的最佳使用浓度和细胞孵育时间,操作容易、成本较低,可帮助初次进行猪肺泡巨噬细胞系培养和氧化应激模型的研究人员比较顺利的完成猪肺泡巨噬细胞系的培养和氧化应激模型的建立。
- 一种永生化罗非鱼巨噬细胞系的建立及鉴定方法-201611040236.3
- 罗洪林;甘西;张永德;陈晓汉;林勇;苏乾莲 - 广西壮族自治区水产科学研究院
- 2016-11-11 - 2017-03-22 - C12N5/0786
- 本发明公开一种永生化罗非鱼巨噬细胞系的建立及鉴定方法,属于细胞生物学技术领域。本发明在分离纯化罗非鱼腹腔巨噬细胞的基础上,利用EBV病毒感染巨噬细胞,通过筛选单克隆细胞的方法,经传代稳定性、体外增殖、端粒酶活性、核型及特异性基因检测等实验鉴定,获得了能连续传代且功能确切的永生化罗非鱼巨噬细胞系。本发明永生化罗非鱼巨噬细胞系为开展病原特性及其致病机理研究、疫苗研制以及功能基因研究等相关领域的理论与应用研究提供了便利。
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