[发明专利]表达外源蛋白的毕赤酵母的诱导表达方法有效
| 申请号： | 201610623309.5 | 申请日： | 2016-07-29 |
| 公开（公告）号： | CN106636174B | 公开（公告）日： | 2019-11-22 |
| 发明（设计）人： | 杨艳坤;张震阳;战春君;白仲虎;刘秀霞;戴晓峰;詹锦玲 | 申请（专利权）人： | 江南大学 |
| 主分类号： | C12N15/81 | 分类号： | C12N15/81;C12P21/02;C12N1/19;C12R1/84 |
| 代理公司： | 11111 北京市万慧达律师事务所 | 代理人： | 王虎<国际申请>=<国际公布>=<进入国 |
| 地址： | 214122 江*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明提供了表达外源蛋白的毕赤酵母菌株及表达系统，该毕赤酵母菌株的GTPI基因发生突变，突变后的毕赤酵母基因不能编码甘油转运蛋白或编码的甘油转运蛋白没有活性，能够在甘油诱导条件下启动PAOX1的转录，从而提高毕赤酵母在甘油诱导条件下AOX1的表达量，从而提高外源蛋白的表达量。同时，本发明还提供了所述表达外源蛋白的毕赤酵母的构建方法，所述表达外源蛋白的毕赤酵母的诱导表达方法，该诱导表达方法能够有效提高外源蛋白表达量及最终细胞浓度。 | ||
| 搜索关键词： | 表达 蛋白 酵母 构建 方法 及其 诱导 | ||
【主权项】：
1.一种表达外源蛋白的毕赤酵母的诱导表达方法，其包括以下步骤，/n步骤1，将含有启动子为PAOX1的外源蛋白表达载体转化至毕赤酵母中，所述毕赤酵母含有突变的毕赤酵母GTP1基因；所述突变为缺失突变，GTP1体外缺失片段序列如SEQ IDNO:3所示；/n步骤2，将步骤1得到的毕赤酵母接种于培养基中培养；/n步骤3，离心步骤2中获得的毕赤酵母菌，并重新培养至含有碳源的培养基中培养；/n所述碳源为甘油，所述甘油添加后的体积浓度B2的范围为0<B2≤0.5％；/n或所述碳源为甲醇，所述甲醇添加后的体积浓度A1的范围为0<A1≤2％；/n或所述碳源为甲醇与甘油的混合物，所述甲醇添加后的体积浓度A2的范围为0<A2≤2％，所述甘油添加后的体积浓度B1的范围为0<B1≤0.5％。/n
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