[发明专利]特异性识别EGFR突变蛋白的单克隆抗体、制备方法及其应用

说明书

技术领域

本发明属于生物科学和药物载体领域，特别涉及特异性识别EGFR突变蛋白的单克隆抗体、制备方法及其作为诊断和治疗试剂的应用。

背景技术

EGFR蛋白(Epidermal Growth Factor Receptor，表皮生长因子受体，也称为ErbB-1或者HER1)是细胞表面的表皮生长因子受体家族的跨膜受体成员。EGFR与细胞外的表皮生长因子（EGF）结合，从而将细胞外的信号传导到细胞内。EGFR蛋白的突变在多种人类癌症，例如肺癌、肛门癌、直肠癌、乳腺癌中都存在（Paez JG et al.,Science,304(5676):1497-500(2004)）。这些突变导致EGFR蛋白的持续激活，进而促进细胞的增殖转化和癌细胞生长。常见的EGFR突变蛋白有G719A、G719C、G719S、D761Y、L858R、L861Q、A839T、N826S、G863D和V769L。

针对EGFR突变蛋白的抑制剂药物已经上市，包括易瑞沙^TM（Iressa^TM，化学名Genfitinib）、特罗凯^TM（Tarceva^TM，化学名Erlotinib）等（Mayumi Ono1and Michihiko Kuwano，Clin.Cancer Res.12:7242(2006)）。这些抑制剂药物特异性针对突变的EGFR蛋白，因此在使用之前，需要用一种能够特异性结合突变的EGFR蛋白但是不结合野生型EGFR蛋白的抗体来检测该病人是否带有EGFR突变(Pallis AG et al.,Br.J.Cancer.105(1):1-8.(2011))。这种抗体可以被用来快速检测少量的取自病人的样品，用于诊断癌症。能够特异性结合EGFR突变蛋白的抗体也是治疗癌症所迫切需要的。

发明内容

本发明的目的是为解决上述问题而提供了分别特异性地识别EGFRG719A、G719C、G719S、D761Y、L858R、L861Q、A839T、N826S、G863D和V769L突变体蛋白的六种单克隆抗体、制备方法及其应用。利用本发明的方法制备出的单克隆抗体能够分别特异性地识别G719A、G719C、G719S、D761Y、L858R、L861Q、A839T、N826S、G863D和V769L突变体蛋白，而不识别野生型EGFR蛋白。

在一些操作实例中，所述的特异性识别EGFR突变蛋白的单克隆抗体或者抗原结合部位，其特征在于，由一条重链和一条轻链组成；重链和轻链的CDR1、CDR2以及CDR3的氨基酸序列分别是由中国典型培养物保藏中心（CCTCC）保藏号为CCTCC C201301、CCTCC C2012127、CCTCC C2012118、CCTCC C201303、CCTCC C2012125、CCTCC C201315、CCTCC C201302、CCTCCC201320、CCTCC C201304以及CCTCC C201316的杂交瘤细胞产生的单克隆抗体的CDR1、CDR2以及CDR3的氨基酸序列决定。在进一步的操作实例中，所述的特异性识别EGFR突变蛋白的单克隆抗体或者抗原结合部位，其特征在于，由分别包含所述杂交瘤细胞所产生的单克隆抗体的重链和轻链的可变区域的氨基酸序列的一条重链和一条轻链组成。在更进一步的操作实例中，抗体或者抗原结合部位包含上述杂交瘤细胞所产生的单克隆抗体的重链和轻链可变区的氨基酸序列。

本发明的单克隆抗体可以是一种人源化的或者嵌合型的抗体。在某些操作实例中，这种单克隆抗体是IgG。

在一方面，本发明包括保存在中国典型培养物保藏中心（CCTCC）保藏号为CCTCC C201301、CCTCC C2012127、CCTCC C2012118、CCTCC C201303、CCTCC C2012125、CCTCC C201315、CCTCC C201302、CCTCC C201320、CCTCC C201304以及CCTCC C201316的杂交瘤细胞。

本发明包括一种含有所述单克隆抗体或者抗原结合部位的药物或者可用于药物的载体。本发明还包括一种含有本发明中提到的单克隆抗体或者其抗原结合部位诊断试剂盒。