[发明专利]一种根瘤菌的快速划线分离方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种菌的快速划线分离方法。

背景技术

根瘤菌能够与豆科作物形成共生固氮关系，为豆科作物提供需要的氮素，因此受到越来越多的关注；然而获得根瘤菌的纯培养物，只能通过在酵母粉(YMA)培养基上通过平板划线法纯化获得，这种方法尤其在进行大量根瘤菌分离试验中，需要消耗大量的时间、大量的人力、物力和财力，直接影响试验的进展和效率。

发明内容

本发明目的是为了解决现有方法进行大量的根瘤菌分离时存在耗时长、效率低和成本高的问题，而提供一种根瘤菌的快速划线分离方法。

一种根瘤菌的快速划线分离方法，按以下步骤进行：

一、根瘤菌培养皿：在培养皿皿体部分设置7个隔板，将培养皿分成8个平行且等宽的区域，每个隔板与培养皿底部均有0.4～0.6cm的间隔，隔板两端固定在培养皿侧壁，隔板上部高度与培养皿侧壁齐平，获得根瘤菌培养皿；

二、移液器枪头预处理：用酒精灯外焰烧制移液器枪头的顶端，形成圆滑球状后冷却凝固，获得预处理后的枪头；

三、划线分离：无菌条件下操作，将YMA培养基倒入步骤一中的根瘤菌培养皿中，至YMA培养基的高度为0.7～0.8cm，冷却凝固，8个经过表面灭菌后的根瘤样品，分别放入到灭菌后的8连PCR管中并编号，8头排枪插好步骤二中预处理后的枪头，然后将8连PCR管中的根瘤样品同时捣碎，并蘸取根瘤菌液，在根瘤菌培养皿中划线，进行分离培养，即完成根瘤菌的快速划线分离方法。

本发明优点：

本发明中根瘤菌培养皿和移液器枪头预处理可大量制作后备用；本发明方法便于应用在大量根瘤菌分离试验中，能快速提高划线的速度及精准度，提高试验效率和加速试验进展，具有耗时短、效率高和成本低的特点，适合推广使用。

附图说明

图1是本发明中根瘤菌培养皿的示意图，其中1表示培养皿，2表示隔板，3表示皿盖；

图2是本发明中移液器枪头预处理前后的对比示意图，其中4表示预处理后的枪头，5表示预处理后枪头的顶端，呈圆滑球状，6表示处理前的枪头。

具体实施方式

本发明技术方案不局限于以下所列举具体实施方式，还包括各具体实施方式间的任意组合。

具体实施方式一：本实施方式一种根瘤菌的快速划线分离方法，按以下步骤进行：

一、根瘤菌培养皿：在培养皿皿体部分设置7个隔板，将培养皿分成8个平行且等宽的区域，每个隔板与培养皿底部均有0.4～0.6cm的间隔，隔板两端固定在培养皿侧壁，隔板上部高度与培养皿侧壁齐平，获得根瘤菌培养皿；

二、移液器枪头预处理：用酒精灯外焰烧制移液器枪头的顶端，形成圆滑球状后冷却凝固，获得预处理后的枪头；

三、划线分离：无菌条件下操作，将YMA培养基倒入步骤一中的根瘤菌培养皿中，至YMA培养基的高度为0.7～0.8cm，冷却凝固，8个经过表面灭菌后的根瘤样品，分别放入到灭菌后的8连PCR管中并编号，8头排枪插好步骤二中预处理后的枪头，然后将8连PCR管中的根瘤样品同时捣碎，并蘸取根瘤菌液，在根瘤菌培养皿中划线，进行分离培养，即完成根瘤菌的快速划线分离方法。

本实施方式中每个隔板与培养皿底部均有0.4～0.6cm的间隔，在制备过程中每个培养皿中隔板与培养皿底部的间隔是相同的。

本实施方式中根瘤菌培养皿和移液器枪头预处理可大量制作后备用，便于应用在大量根瘤菌分离试验中。

具体实施方式二：本实施方式与具体实施方式一不同的是，步骤一中隔板的材质为高透光塑料或玻璃。其它步骤及参数与具体实施方式一相同。

具体实施方式三：本实施方式与具体实施方式一或二不同的是，步骤一中隔板的厚度为1～2mm。其它步骤及参数与具体实施方式一或二相同。

具体实施方式四：本实施方式与具体实施方式一至三之一不同的是，步骤一中每个隔板与培养皿底部均有0.4cm的间隔。其它步骤及参数与具体实施方式一至三之一相同。

具体实施方式五：本实施方式与具体实施方式一至三之一不同的是，步骤一中每个隔板与培养皿底部均有0.5cm的间隔。其它步骤及参数与具体实施方式一至三之一相同。

具体实施方式六：本实施方式与具体实施方式一至三之一不同的是，步骤一中每个隔板与培养皿底部均有0.6cm的间隔。其它步骤及参数与具体实施方式一至三之一相同。