[发明专利]具有改良特性的嗜热脂肪土芽孢杆菌α-淀粉酶(AMYS)变体无效
申请号: | 200980121027.3 | 申请日: | 2009-06-02 |
公开(公告)号: | CN102057040A | 公开(公告)日: | 2011-05-11 |
发明(设计)人: | W·A·奎瓦斯;D·A·埃斯特尔;S·H·哈迪;李祥揆;S·W·拉默;A·肖;A·R·托波扎达;W·韦勒 | 申请(专利权)人: | 丹尼斯科美国公司 |
主分类号: | C12N9/28 | 分类号: | C12N9/28;C11D3/386 |
代理公司: | 北京市中咨律师事务所 11247 | 代理人: | 黄革生;凌立 |
地址: | 美国加利*** | 国省代码: | 美国;US |
权利要求书: | 查看更多 | 说明书: | 查看更多 |
摘要: | 本发明描述了亲本α-淀粉酶的变体,该变体与该亲本α-淀粉酶相比呈现出下列性质中至少一种性质的改变:比活、底物特异性、底物结合、底物裂解、热稳定性、pH依赖活性、pH依赖稳定性、氧化稳定性、钙依赖性、pI和洗涤性能。该变体适用于淀粉转化、乙醇生产、衣物洗涤、盘碟洗涤、硬表面清洁、纺织品脱浆和/或增甜剂生产。 | ||
搜索关键词: | 具有 改良 特性 脂肪 芽孢 杆菌 淀粉酶 amys 变体 | ||
【主权项】:
具有α‑淀粉酶活性和至少一种改变的特征的变体多肽,所述改变的特征改良酶的性能,所述变体多肽包含:与选自AmyS(SEQ ID NO:1)或AmyS的截短变体(SEQ ID NO:2)的亲本α‑淀粉酶多肽具有至少60%氨基酸序列同一性的氨基酸序列,和在通过比对变体多肽与亲本多肽而确定的亲本α‑淀粉酶多肽的氨基酸残基相应的氨基酸残基处具有至少一种以下突变,其中所述突变改变来自亲本多肽的氨基酸残基:a)在一个或多个位点引入带正电的氨基酸残基的取代,所述氨基酸残基选自D19、N28、E29、Q86、Q89、Q97、N224、N271、N281、D306、D318、Q319、Q358、D393、Q443和D458;b)引入一个或多个氨基酸残基的取代,所述氨基酸残基选自74A、115L、124K、124R、132A、132C、135A、145A、146A、148A、148N、159A、159C、159D、159E、159F、159G、159H、159K、159L、159N、159R、159S、159T、159V、169A、169L、169M、169Y、179A、181A、181C、181D、181E、181L、181P、181Q、181V、181Y、242A、242D、242E、242Q、261L、271A、271V、278A、278H、278K、278N、278R、281A、281L、281M、302D、302M、304D、304E、304M、321A、321H、321Q、321R、333Q、378D、378N、378R、382D、398A、418A、418M、418N、420A、421R、432A、432D、432L、432M、432N、432Q、432R、432Y、437D、437G、437H、437L、437M、437Y、446A、446Y、454A、464Q、464Y、474A、474E、474K、474L、474M、474N、474P、474Q、474R、474S和474V;c)引入一个或多个氨基酸残基的取代,所述氨基酸残基选自6I、6N、6Q、6T、6V、14T、16F、25A、25C、25G、25Q、27M、36Q、36S、39G、39V、50I、50L、50M、50N、50Q、52S、53T、67N、67S、80D、80I、90E、133P、133V、137M、137S、141E、141I、141L、141M、141Q、141R、141S、141V、150E、151I、152G、155S、155Y、168W、173T、188P、193F、193K、193L、193Y、213L、213M、213V、217Q、220P、220Q、220R、220S、220V、221I、221S、249E、250F、250I、250M、252L、253Y、254E、254F、254T、254V、255F、255K、255W、257L、257M、257S、257V、258D、258G、258H、258K、258Q、258T、258V、268F、274W、283M、283N、283V、285E、285Q、293G、293K、294W、301F、301I、301P、301R、301T、301W、309D、309V、312H、312S、312V、312Y、313G、313H、313I、313L、313S、313V、318T、338A、338C、338G、338M、338T、339K、339T、339V、340A、340M、340Q、340T、343C、343I、343P、343R、343Y、345I、345Q、369I、369T、370G、375T、385T、386K、394L、394V、400A、400N、400V、402H、402I、402T、402V、402W、403A、403E、403G、403Q、403R、403T、403V、404C、404E、404G、404I、404V、419A、419C、419M、419T、422E、422G、433A、433H、433I、433K、433L、433M、433V、433Y、442A、442G、442N、442R、442S、442T、442V、442W、442Y、445G、445I、445N、445T、445V、445W、447I、447N、447Q、447W、447Y、448C、448F、448G、448H、448I、448N、448Y、450C、450H、450M、450N、450R、450S、450T、450W、455G、455I、455P、455V、463A、463M、463S、463T、463V、463W、465G、465I、465K、465N、465T、465V、469D、469W、469Y、471I、471V、473G、473Y、476A、476G、476L、476M、476N和476T;d)引入一个或多个氨基酸残基的取代,所述氨基酸残基选自124N、125A、125K、125N、130A、130S、159A、159D、159E、159G、159H、159K、159L、159N、159R、159S、159T、166F、166G、166H、166S、166Y、169L、179A、179P、180A、180D、180H、180K、180L、180N、180T、180V、180Y、181A、181D、181E、181G、181P、181R、181S、181V、187A、187C、187K、187N、187P、187Q、187R、187S、242H、242N、278H、278K、278N、278R、281M、302D、304M、304Y、321H、321Q、321R、333Q、432Q、437Y、446A、474Q和474S;e)引入一个或多个氨基酸残基的取代,所述氨基酸残基选自6A、6D、6E、6H、6I、6K、6L、6M、6N、6P、6Q、6R、6S、6T、6V、6W、6Y、13K、14F、14T、14Y、15A、15D、15E、015G、15H、15K、15N、15P、15Q、15R、15S、15T、15W、16A、16E、16G、16H、16K、16N、16P、16Q、16R、16T、25C、39D、39E、39N、39Q、81Y、121P、139D、139H、139R、139Y、177A、188D、191H、191K、192A、192D、192G、192N、192P、192Q、192S、192T、192V、192Y、196A、196C、196D、196E、196F、196H、196I、196K、196P、196R、196S、196T、196V、201A、201E、201G、201H、201M、202H、216E、216G、216H、216M、216Q、216R、216S、216T、216Y、221A、221D、221F、221I、221L、221M、221N、221R、221S、221V、221Y、237G、240G、240N、240P、240Q、240R、240T、246R、250A、250D、250E、250F、250G、250I、250K、250L、250M、250N、250Q、250R、250S、250W、252K、268A、268D、268E、268G、268H、268K、268N、268P、268Q、268R、268S、274A、274D、274G、274I、274K、274L、274N、274Q、274R、274S、274T、275K、285Q、285Y、293K、293R、318A、318F、318G、318I、318K、318L、318M、318R、318S、318T、318V、318Y、319C、319D、319H、319I、319K、319R、319Y、320K、320R、320T、338A、338G、338I、338M、338P、338S、338V、339G、339P、340A、340D、340E、340H、340K、340N、340Q、345E、363D、363E、363M、363N、363Q、363S、366Q、370A、370D、370E、370H、370K、370N、370Q、370S、375A、375D、375E、375K、375N、375Q、375R、375S、419A、419I、419M、419P、419S、419V、448Y、452N、452Q、452R、452S、471R和471Y;和f)引入一个或多个氨基酸残基的取代,所述氨基酸残基选自I181A、I181P、I181C、I181E、I181Y、S242A、S242E、G132A、N193Y和E188P。
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- 本发明的目的是提供一种新型α‑淀粉酶,其氨基酸序列为SEQ ID NO1,编码上述α‑淀粉酶的基因,其一种核苷酸序列为SEQ ID NO2。本发明的α‑淀粉酶具有更宽的温度耐受范围,50℃下测得酶比活力高达5776U/mg,而其在低温10℃下仍能保持38%左右的活性。
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- C.安德森;I.达玛格;A.芒克;T.霍夫 - 诺维信公司
- 2015-11-20 - 2017-08-18 - C12N9/28
- 本发明涉及α‑淀粉酶变体。本发明还涉及编码这些变体的多核苷酸;包含这些多核苷酸的核酸构建体、载体、以及宿主细胞;以及使用这些变体的方法。
- 来自枯草芽孢杆菌的变体α‑淀粉酶及其使用方法-200980129863.6
- R·金;W·A·奎瓦斯;D·A·埃斯特尔;S-K·李;M·J·佩珀森;S·D·鲍尔;S·W·拉默;C·A·里夸德特;A·肖;A·R·托波扎达;L·华莱士 - 丹尼斯科美国公司
- 2009-06-05 - 2017-06-09 - C12N9/28
- 本发明提供来自枯草芽孢杆菌的α‑淀粉酶(AmyE)、其变体、编码其的核酸、和包括该核酸的宿主细胞。公开使用AmyE或其变体的方法,包括淀粉的液化和/或糖化。这些方法可以产生对于乙醇生产或高果糖玉米糖浆生产有用的糖。在某些情况下,该淀粉酶可以在低pH、在缺乏钙的情况下和/或在缺乏葡糖淀粉酶的情况下使用。
- 氧化稳定的α‑淀粉酶变体-201580030895.6
- C.安德森;A.D.霍格;S.E.拉森;A.法拉赫-阿拉吉 - 诺维信公司
- 2015-06-12 - 2017-05-10 - C12N9/28
- 本发明涉及氧化稳定的α‑淀粉酶变体。本发明还涉及编码这些变体的多核苷酸;包括这些多核苷酸的核酸构建体、载体以及宿主细胞;以及使用这些变体的方法。
- 淀粉酶变体-201580034095.1
- S·耶内维因;S·尼德迈尔 - 巴斯夫欧洲公司
- 2015-04-15 - 2017-05-10 - C12N9/28
- 本发明涉及淀粉酶领域,特别是α‑淀粉酶,以及包含该淀粉酶的组合物。本发明还描述了用于生产该淀粉酶的手段和方法、以及淀粉酶和含淀粉酶组合物的用途,例如用于清洁含淀粉污渍、纺织品脱浆、淀粉液化和糖化、烘焙和酿造。本发明还公开了用于在发酵、淀粉酶或含淀粉酶制剂的配制和储存期间增加淀粉酶纯度的手段。
- 一种耐高温α‑淀粉酶及其制备方法和应用-201510004498.3
- 刘逸寒;王正祥;路福平;王春霞;王建玲 - 天津科技大学
- 2015-01-06 - 2017-03-15 - C12N9/28
- 本发明涉及一种新型的耐高温α‑淀粉酶及其基因和制备方法,通过PCR定点突变野生型耐高温α‑淀粉酶基因,并使其在枯草芽孢杆菌中高效表达。本发明的新型的耐高温α‑淀粉酶在高温和酸性环境下稳定性高,能够更好的适应工业生产,以达到节能减耗,提高效率的作用。其技术方案是从地衣芽孢杆菌中分离野生型耐高温α‑淀粉酶基因,对其His316的氨基酸残基进行突变,经在枯草芽孢杆菌中高效表达,在90℃和pH4.5的条件下,该新型的耐高温α‑淀粉酶(His316→Arg)比野生型的耐高温α‑淀粉酶稳定性均有提高。
- 一种高温活性和热稳定性提高的α‑淀粉酶突变体ApkA‑m及其制备方法和应用-201510686340.9
- 曾静;袁林;郭建军;郭浩;王林庚 - 江西省科学院微生物研究所;江西鑫维生物技术有限公司
- 2015-10-20 - 2017-03-08 - C12N9/28
- 本发明公开了一种高温活性和热稳定性提高的α‑淀粉酶突变体ApkA‑m及其制备方法和应用。本发明公开了一种高温活性和热稳定性提高的α‑淀粉酶及其编码基因,以来源于极端嗜热古生菌Thermococcus kodakarensis KOD1的α‑淀粉酶ApkA为母本,采用分子生物学技术对ApkA的氨基酸序列进行定点突变,选择的突变位点为K152H和A166C。在此改造条件下,α‑淀粉酶ApkA突变体的最适反应温度由对照(突变前)的90℃提高到100℃;于110℃绝对酶活由对照(突变前)的566.03U/mg提高至4463.67U/mg,提高了7.89倍;于100℃半衰期由对照(突变前)的7.5min延长至80min,提高了10.67倍。
- 一种麦芽糖淀粉酶的突变体及其制备方法-201510025813.0
- 吴敬;段绪果;孙烨橙;王蕾 - 江南大学
- 2015-01-19 - 2017-02-22 - C12N9/28
- 一种麦芽糖淀粉酶的突变体及其制备方法,属于基因工程和酶工程领域。是将嗜热脂肪芽孢杆菌(Bacillus stearothermophilus)来源的麦芽糖淀粉酶转苷活性中心的氨基酸残基的取代,与其亲代的麦芽糖淀粉酶相比,其对麦芽糖具有更高的转化效率以及更少的转化副产物。所述B.stearothermophilus麦芽糖淀粉酶突变体,至少以下性质之一发生改变1)生产周期缩短;2)产物比例提高。这些突变体比野生型麦芽糖淀粉酶更适合用于麦芽糖生产过程。
- 一种热稳定性提高的淀粉酶突变体及其制备方法和应用-201410461796.0
- 陈坚;刘龙;邓壮梅;堵国成;杨海泉 - 江南大学
- 2013-09-17 - 2017-02-15 - C12N9/28
- 本发明公开了一种热稳定性提高的淀粉酶突变体及其制备方法和应用,属于酶工程领域。本发明利用分子生物学技术进行多轮定点突变获得了热稳定性提高的淀粉酶突变体,所得淀粉酶在60℃的半衰期由对照(突变前)例的3.2min提高到23.9min。利用此策略可以显著提高淀粉酶的热稳定性,为其工业化生产提供了基础。此策略对其它酶的性质改造具有重要的指导意义。
- α‑淀粉酶变体以及对其进行编码的多核苷酸-201580029823.X
- C.安德森;C.加迪亚拉姆;R.K.萨伊纳坦;P.巴卢穆里;P.V.伊耶;I.达马杰;A.蒙克;S.克里希纳 - 诺维信公司
- 2015-06-12 - 2017-02-15 - C12N9/28
- 本发明涉及具有α‑淀粉酶活性的变体和编码这些变体的多核苷酸。本发明还涉及包含这些多核苷酸的核酸构建体、载体和宿主细胞,包含这些变体的组合物,以及产生和使用这些变体的方法。
- 淀粉酶多肽-201080021717.4
- K·M·克劳;A·H·凯利特-史密斯;R·米科尔森;R·梅吉达尔;R·L·B·詹纳 - 杜邦营养生物科学有限公司
- 2010-05-19 - 2016-11-16 - C12N9/28
- 本发明涉及多肽,更具体地为淀粉酶多肽和编码它们的核酸,以及它们的用途,例如在食品或饲料产品生产中作为非麦芽生成性外切淀粉酶。
- α-淀粉酶变体以及对其进行编码的多核苷酸-201480068977.5
- C.安德森 - 诺维信公司
- 2014-12-19 - 2016-08-03 - C12N9/28
- 本发明涉及具有α‑淀粉酶活性的变体和编码这些变体的多核苷酸。本发明还涉及包含这些多核苷酸的核酸构建体、载体和宿主细胞,以及产生和使用这些变体的方法。
- 一种耐高温淀粉酶、其编码基因及其应用-201410712820.3
- 张元兴;蔡孟浩;周祥山;蒋涛;黄猛猛 - 华东理工大学
- 2014-11-28 - 2016-06-22 - C12N9/28
- 本发明涉及一种耐高温淀粉酶、其编码基因及其应用。首次分离获得一种来源于深海海洋嗜热细菌(Geobacillus sp.4j)的耐高温α-淀粉酶,其具有酶活性高且热稳定性高的特点。
- α-淀粉酶变体以及对其进行编码的多核苷酸-201480053474.0
- C.安德森;C.加迪亚拉姆;R.K.赛内森;P.巴卢缪里 - 诺维信公司
- 2014-09-30 - 2016-05-11 - C12N9/28
- 本发明涉及具有α-淀粉酶活性的变体和编码这些变体的多核苷酸。本发明还涉及包括这些多核苷酸的核酸构建体、载体以及宿主细胞连同产生和使用这些变体的方法。
- 具有淀粉酶活性的多肽以及对其进行编码的多核苷酸-201480034508.1
- I.达马格;T.霍夫;A.芒奇 - 诺维信公司
- 2014-06-23 - 2016-02-10 - C12N9/28
- 本发明涉及具有α-淀粉酶活性的分离的多肽和编码这些多肽的多核苷酸。本发明还涉及包括这些多核苷酸的核酸构建体、载体以及宿主细胞连同产生和使用这些多肽的方法。
- 专利分类