[发明专利]一种蛋白激酶的活性检测方法及其抑制剂筛选方法在审
| 申请号： | 201310430041.X | 申请日： | 2013-09-18 |
| 公开（公告）号： | CN104450867A | 公开（公告）日： | 2015-03-25 |
| 发明（设计）人： | 魏世英;匡海门;其他发明人请求不公开姓名 | 申请（专利权）人： | 匡海门 |
| 主分类号： | C12Q1/66 | 分类号： | C12Q1/66;C12Q1/48 |
| 代理公司： | 上海弼兴律师事务所 31283 | 代理人： | 朱水平;沈利 |
| 地址： | 200003 *** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种RIP3蛋白激酶活性检测方法，一种RIP3蛋白激酶抑制剂的筛选方法以及一种筛选RIP3蛋白激酶抑制剂的试剂盒。本发明所述RIP3蛋白激酶活性检测方法无污染、安全性高、灵敏度高、通量高而且简便易操作。利用本发明所述RIP3蛋白激酶抑制剂筛选方法，能够高效特异地筛选RIP3蛋白激酶抑制剂，并发现索拉菲尼和威罗菲尼具有RIP3蛋白激酶抑制活性。本发明所述筛选RIP3蛋白激酶抑制剂的试剂盒具有特异性高，使用方法简便的优点。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 蛋白激酶 活性 检测 方法 及其 抑制剂 筛选 | ||
【主权项】：
一种RIP3蛋白激酶抑制剂的筛选方法，其特征在于，所述筛选方法包括以下步骤：（1）配制反应缓冲液，所得反应缓冲液的pH值为6.5～7.0，在该反应缓冲液中加入RIP3蛋白激酶和/或髓鞘碱性蛋白，待测RIP3蛋白激酶抑制剂，之后加入ATP，从而配制成反应体系溶液，该反应体系溶液中髓鞘碱性蛋白浓度为15ng/μl～30ng/μl，RIP3蛋白激酶浓度为5U/μl，ATP浓度为10μM～20μM，震荡或静置条件下进行反应，反应温度为20℃～30℃，反应时间为60～90分钟；（2）检测步骤（1）所得反应体系溶液中ATP的浓度，根据ATP的浓度计算RIP3蛋白激酶抑制剂的抑制率。
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- 本发明涉及饮用水领域，具体涉及一种矿泉水中微量大肠杆菌的检测方法。本发明PCR扩增得到PPK、ADK基因，插入表达载体pET28a(+)中构建重组表达质粒pET28a(+)‑PPKADK，表达PPK‑ADK融合蛋白，利用表面包裹聚胺醇的磁珠，通过化学反应将腺苷酸双磷酸酶固定于磁珠表面，制备固相腺苷酸双磷酸酶，用于除去与融合蛋白结合的内源性ADP，降低ATP扩增反应的背景，从而使之与生物发光反应相结合，可以快速有效的测定微量外源ATP及细菌菌落数，矿泉水中经过杀菌消毒，只含有微量的大肠杆菌。
- 荧光素酶报告基因法猪干扰素α生物学活性检测方法-201711264195.0
- 赵俊;王明丽;甘霖;王利利;赵雨;梅志强;蒋敏之 - 安徽九川生物科技有限公司
- 2017-12-05 - 2018-03-27 - C12Q1/66
- 本发明公开了一种荧光素酶报告基因法猪干扰素α生物学活性检测方法及其应用。该方法包括以下步骤采用PCR扩增获取猪Mx1蛋白的pMx1的基因片段；将pMx1的基因片段插入pGL3‑basic载体luc基因的5'端，再采用PCR扩增得到pMx1‑luc融合基因片段；用pMx1‑luc融合基因片段替代pEGFP‑N1载体中的pCMV和EGFP的基因片段，构建pMx1‑luc质粒，转染细胞，并选出稳定转染细胞株；对筛选出的稳定转染细胞株进行克隆化培养；以梯度稀释的猪干扰素α标准品制备标准曲线，将待检猪干扰素α样品加入克隆化培养后的细胞中共孵育，然后检测荧光强度，结合标准曲线评价待检猪干扰素α样品的效价。
- 荧光素酶报告基因法鸡干扰素α生物学活性检测方法-201711264212.0
- 赵俊;王明丽;王利利;甘霖;赵雨;梅志强;蒋敏之 - 安徽九川生物科技有限公司
- 2017-12-05 - 2018-03-27 - C12Q1/66
- 本发明公开了一种荧光素酶报告基因法鸡干扰素α生物学活性检测方法及其应用。该方法包括以下步骤采用PCR扩增获取鸡Mx1蛋白的pMx1的基因片段；将pMx1的基因片段插入pGL3‑basic载体luc基因的5'端，再采用PCR扩增得到pMx1‑luc融合基因片段；用pMx1‑luc融合基因片段替代pEGFP‑N1载体中的pCMV和EGFP的基因片段，构建pMx1‑luc质粒，转染细胞，并选出稳定转染细胞株；对筛选出的稳定转染细胞株进行克隆化培养；以梯度稀释的鸡干扰素α标准品制备标准曲线，将待检鸡干扰素α样品加入克隆化培养后的细胞中共孵育，然后检测荧光强度，结合标准曲线评价待检鸡干扰素α样品的效价。
- 荧光素酶报告基因法牛干扰素α生物学活性检测方法-201711264307.2
- 赵俊;王明丽;蒋敏之;甘霖;王利利;赵雨;梅志强 - 安徽九川生物科技有限公司
- 2017-12-05 - 2018-03-27 - C12Q1/66
- 本发明公开了一种荧光素酶报告基因法牛干扰素α生物学活性检测方法及其应用。该方法包括以下步骤采用PCR扩增获取牛Mx1蛋白的pMx1的基因片段；将pMx1的基因片段插入pGL3‑basic载体luc基因的5'端，再采用PCR扩增得到pMx1‑luc融合基因片段；用pMx1‑luc融合基因片段替代pEGFP‑N1载体中的pCMV和EGFP的基因片段，构建pMx1‑luc质粒，转染细胞，并选出稳定转染细胞株；对筛选出的稳定转染细胞株进行克隆化培养；以梯度稀释的牛干扰素α标准品制备标准曲线，将待检牛干扰素α样品加入克隆化培养后的细胞中共孵育，然后检测荧光强度，结合标准曲线评价待检牛干扰素α样品的效价。
- 一种快速测定IL‑6/IL‑6受体抗体药物生物学活性的方法-201710897630.7
- 王军志;于传飞;高凯;王兰;曹俊霞;杨雅岚 - 中国食品药品检定研究院
- 2017-09-28 - 2018-03-06 - C12Q1/66
- 本发明涉及一种快速测定IL‑6及IL‑6受体抗体药物生物学活性的方法。所述方法包括构建得到稳定表达SIE报告基因的效应细胞，用IL‑6刺激激活报告基因表达，并用IL‑6/IL‑6R抗体药物阻断IL‑6信号通路，根据测定的报告基因信号值拟合四参数曲线确定抗体生物学活性。本发明针对IL‑6/IL‑6R抗体药物生物学活性测定建立了更加快速、准确的定量检测方法，实验周期短，操作简便，并且避免了长时间孵育所带来的细胞污染可能性等客观因素的问题。
- 一种荧光素酶互补量子点生物传感器及其构建方法及其应用-201410854006.5
- 金宗文;罗擎颖;袁静 - 中国科学院深圳先进技术研究院;深圳市易瑞生物技术有限公司
- 2014-12-31 - 2017-07-28 - C12Q1/66
- 本发明提供了一种荧光素酶互补量子点生物传感器及其构建方法及其应用，属于生物传感技术领域。所述荧光素酶互补量子点生物传感器包括量子点、荧光素酶氨基端片段、荧光素酶羧基端片段、可特异识别待测物的探针和可与所述荧光素酶发生生物发光反应的底物；本发明结合量子点传感器的光学优势，通过实现荧光素酶氨基端片段和羧基端片段在量子点表面的诱导互补，重建催化功能，构建得到新型高灵敏度生物传感器，其背景噪音低、灵敏度高、结构稳定，易于使用，可应用于多种生物标记物的高靶向检测，并适于在均相体系中对目标检测物的准确定量。
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