[发明专利]一种目的基因转化原生质体的方法

摘要

本发明提供一种原生质体的提取方法，该方法包括如下步骤：(1)原材料处理；(2)酶解释放原生质体；(3)原生质体的纯化。本发明的原生质体提取方法获得的原生质体可用于目的基因转化原生质体，为重要候选基因分析和遗传转化提供了技术支持，为生物工程进行种质利用和改良奠定基础，具有广阔的应用前景。

主权项

1.一种原生质体的提取方法，其特征在于该方法包括如下步骤：(1)原材料处理：将石蒜科植物幼苗，黑暗处理10‑12h后，将幼苗叶片切为碎片；(2)酶解释放原生质体：将步骤(1)中得到的碎片放入试剂A中，温度22‑28℃，震荡处理1‑6h，得到混合溶液；(3)原生质体的纯化：将步骤(2)获得的混合溶液用40‑50μm滤网进行过滤，收集滤液，滤液离心5‑10min，离心温度为4℃，收集沉淀；沉淀用试剂B清洗、离心，最后离心沉淀用试剂C悬浮，得到原生质体悬浮液；其中所述的试剂A为：Cellulase R10：0.05‑0.5g、Macerozyme R10：0.01‑0.5g、Mannitol：1‑10g、MES：0.01‑1.0g、CaCl2：0.01‑1.0g、H2O：补足20ml体积；试剂B为：NaCl：0.45‑4.5g、CaCl2：0.5‑6.0g、KCl：0.01‑1.0g、MES：0.02‑2.0g、H2O：补足100ml体积；试剂C为：Mannitol：0.5‑5.0g、MgCl2·6H2O：0.01‑1.0g、MES：0.001‑0.1g、H2O：补足10ml体积。