本发明公开了一种白花龙离体快速繁殖的方法,包含以下步骤:(1)种子萌发;(2)继代培养;(3)壮苗与生根培养;(4)炼苗和移栽。本发明所述白花龙离体快速繁殖的方法中去除白花龙种壳以增加透气性、透水性,去除胚乳降低萌发抑制物和导致种子褐化的物质对种子的影响,提高了萌发率、成活率以及缩短了萌发时间。优化增殖培养基的激素种类和浓度的配比以提高增殖系数。优化了生根方法、生根基本培养基和激素种类、浓度的配比以提高生根率、增加生根数和缩短生根时间。本发明所述白花龙离体快速繁殖的方法实现了离体培养快速繁殖,为白花龙在园林绿化、边坡修复、药用和油脂用等方面的种苗供应奠定基础。
1.一种白花龙离体快速繁殖的方法,其特征在于,包含以下步骤:(1)种子萌发:将白花龙种子用酒精浸泡40~80s,用无菌水洗去种子表面的酒精,剥除外种壳,用升汞浸泡4~6min,用无菌水洗去种子表面的汞,晾干,去除种子的胚乳,得外植体,将外植体接种至萌发诱导培养基中进行萌发诱导,得无菌苗;(2)继代培养:将步骤(1)获得的无菌苗切成带1~3个节的茎段接种至丛生芽诱导培养基中进行丛生芽诱导;(3)壮苗与生根培养:选择步骤(2)获得的高为1.0~2.0cm的丛生芽接种于壮苗培养基上培养30~45天以壮苗;选择壮苗后生长良好的幼苗切成带1~3个节的茎段用于直接生根培养或间接生根培养;(4)炼苗和移栽:将步骤(3)所得植株,置于荫棚内炼苗,6~8天后移栽至基质上,得白花龙幼苗;步骤(1)中,所述的萌发诱导培养基包含MS、0.5~4.0mg/L GA3、20~35g/L蔗糖、3.5~7.5g/L琼脂,所述的萌发诱导培养基的pH值为5.5~6.2;步骤(2)中,所述丛生芽诱导培养基包含MS、0.1~3.0mg/L BA、0~0.5mg/L NAA、0~0.5mg/L TDZ、20~35g/L蔗糖和3.5~7.5g/L琼脂,所述丛生芽诱导培养基的pH值为5.5~6.2;步骤(3)中,所述壮苗培养基包含MS、0.1~1.5mg/L BA、0.01~0.5mg/L NAA、0.05~1.5mg/L GA3、20~35g/L蔗糖和3.5~7.5g/L琼脂,所述壮苗培养基的pH值为5.5~6.2;步骤(3)中,所述直接生根培养的培养基包含1/4MS~MS、0.5~5.0mg/L IBA、20~35g/L蔗糖和3.5~7.5g/L琼脂,所述直接生根培养基的pH值为5.5~6.2;步骤(3)中,所述间接生根培养的方法为:先将茎段的基部置于浓度为50~500mg/L的IBA中浸泡10~20min,再转接到间接生根培养基上培养;所述间接生根培养基包含1/4MS~MS、20~35g/L蔗糖和3.5~7.5g/L琼脂,所述间接生根培养基的pH值为5.5~6.2。
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