[发明专利]一种从鱼肉中提取阿苯达唑类化合物的检测方法

说明书

本发明公开了一种从鱼肉中提取阿苯达唑类化合物的检测方法：均质处理的鱼肉，用乙酸乙酯萃取，正己烷净化，乙腈浓缩，外标法定量，高效液相色谱串联质谱法检测。本发明提出了一种快速筛选合格乙酸乙酯的方法，以避免可能存在的能氧化阿苯达唑的杂质。本方法中阿苯达唑亚砜、阿苯达唑砜和阿苯达唑氨基砜的检测限分别为0.27、0.09和0.11μg/kg。欧盟和中国对阿苯达唑在反刍动物中的最高残留限量规定，残留标志为阿苯达唑亚砜、阿苯达唑砜和阿苯达唑氨基砜总和，在肌肉基质中不得超过100μg/kg。因此本方法十分适用于检测鱼肉中阿苯达唑的残留，具有简单快速、成本低、灵敏度高的优点。

本发明涉及一种从鱼肉中提取阿苯达唑类化合物的检测方法，属于环境保护技术领域。

背景技术

阿苯达唑(ABZ)是一种高效广谱驱虫药，被广泛应用于包括水产养殖业在内的多个领域。在生物体内，阿苯达唑会迅速代谢为3个主要代谢物：阿苯达唑亚砜(ABZ-SO)，阿苯达唑砜(ABZ-SO₂)和阿苯达唑氨基砜(ABZ-NH₂-SO₂)。它的驱虫活性主要决定于它的一级代谢物ABZ-SO，ABZ-SO也可以单独作为驱虫药使用。动物试验研究发现了ABZ和ABZ-SO都存在致畸效应。有文献提出，在服用ABZ后的初始阶段，生物体内最可能被检测到的残留是ABZ-SO和ABZ-SO₂，残留时间最长的是ABZ-NH2-SO₂。目前各国家机构、国际组织已有的对阿苯达唑最高残留限量(MRL)的定义，残留标志存在一定的争议。欧盟和中国对ABZ在反刍动物体内最高残留限量(MRL)的定义，以ABZ-SO、ABZ-SO₂和ABZ-NH₂-SO₂的总和作为ABZ的残留标志，肌肉基质中MRL为100μg/kg。

乙酸乙酯被许多研究者认为是从高蛋白质鱼肉基质中提取苯并咪唑类残留最合适的溶剂，目前涉及使用乙酸乙酯提取ABZ的文献中，乙酸乙酯中可能存在引起ABZ大量氧化成ABZ-SO的杂质并没有被报道。目前国内已有的标准方法和近10年的文献方法中，检测动物产品中阿苯达唑类残留主要的前处理方法是固相萃取法(SPE)和液-液萃取法(LLE)。固相萃取法操作复杂，成本高昂。内标物，尤其是同位素内标的引入更加重了检测成本，不利于推广。多数文献在同时检测几十甚至上百种兽药的时候，没有良好匹配相关国家机构或国际组织对阿苯达唑MRL的规定。因此，为了预防鱼肉中ABZ残留给人类带来的健康风险，如何开发一种普适性高、成本低廉、简单快速、灵敏度高的检测方法是目前迫切需要解决的问题。

发明内容

本发明要解决的技术问题是克服现有技术的不足，参考欧盟、中国的MRL法规，以代谢物ABZ-SO、ABZ-SO₂和ABZ-NH₂-SO₂的总和作为ABZ的残留标志，规定鱼肉基质中最高残留限量不超过100μg/kg，提供一种普适性高、成本低廉、简单快速、灵敏度高的检测方法。

为解决上述技术问题，提供了一种从鱼肉中提取阿苯达唑类化合物的检测方法，包括以下步骤：

S1、称取2g均质鱼肉放入50mL离心管，提取过程为：加入10mL筛选合格的乙酸乙酯，涡旋1min，超声10min，6000rpm离心5min，上层清液转移至100mL旋蒸瓶；

S2、重复S1中的提取过程，合并上清液，旋蒸至干；

S3、旋蒸瓶内的残留物，用1mL有机溶剂溶解，超声1min助溶，溶液转移至4mL离心管；

S4、用2mL除脂溶剂分两次洗涤旋蒸瓶，溶液合并至4mL离心管，涡旋1min，6000rpm离心5min，除去上层溶剂；

S5、吸取700μL的下层清液，氮吹至干，用等体积的水溶液溶解，涡旋1min，过0.22μm有机相针式滤器，用液相色谱串联质谱法检测，外标法定量。